Изучение свойств и методик определения витамина Р

Ранее было показано, что флавоноиды обладают гиполипидемическим эффектом у лабораторных животных. По данным эпидемиологических исследований, потребление чая ассоциируется сболее низкими уровнями холестерина и меньшей частотой инфаркта миокарда. Данное исследование впервые изучало гиполипидемический эффект компонентов чая у человека.

"Мы ожидали, что эффект будет небольшим, однако  на самом деле уровень холестерина  липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) снизился на 16%", пишут д-р David J. Maron и его коллеги (Университет Vanderbilt, Nashville, Теннеси) в номере Archives of Internal Medicine за 23 июня.

В течение 12 недель 240 человек с "мягкой" и умеренной гиперхолестеринемией рандомизированно поучали капсулы с теафлавинами и катехинами либо плацебо. Все участники соблюдали диету с низким содержанием жиров.

В группе активного вмешательства уровни общего холестерина снизились на 11.3%, холестерина ЛПНП - на 16.4%, по сравнению с исходными значениями (р=0.01). Кроме того, отмечалось статистически недостоверное повышению уровней холестерина липопротеинов высокой плотности и триглицеридов. В группе плацебо показатели липидного обмена оставались неизменными.

Частота побочных явлений была одинаковой в обеих группах. Ни в одной из групп не отмечалось тяжелых нежелательных явлений.

"Мы считаем  целесообразным проведение крупных  и длительных рандомизированных  контролируемых клинических испытаний  в различных популяциях с целью  изучения влияния компонентов  чая на другие факторы риска  атеросклероза", заключают авторы.

Arch Intern Med. 2003;163:1448-53.

Cardiosite.ru

 

29 апреля 2003 г. Антиоксиданты-полифенолы, содержащиеся  в оливковом масле и красном  вине, ингибируют экспрессию молекул  эндотелиальной адгезии. Именно  с эти может быть связан  их антиатерогенный протективный  эффект, сообщается в апрельском  номере Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology.

Как известно, средиземноморская диета ассоциируется с меньшей частотой развития атеросклероза. Тем не менее, до сих пор было неизвестно точно, какие именно компоненты этой диеты оказывают специфическое протективное действие.

Д-р Raffaele De Caterina и его коллеги (Университет Габриэле Д’Аннунцио, Chieti, Италия) изучали влияние полифенолов оливкового масла и красного вина на экспрессию эндотелиальных молекул адгезии моно- и лейкоцитов на культуре клеток эндотелия умбиликальной вены человека.

 

Три полифенола - с антиоксидантной активностью - олеуропеин, гидрокситирозол и резвератрол - достоверно подавляли экспрессию молекул адгезии (vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1). Два других изучавшихся полифенольных соединения на экспрессию VCAM-1 не влияли.

Оказалось, что три антиоксиданта-полифенола подавляют транскрипцию VCAM-1, действуя на такие факторы транскрипции, как ядерный фактор каппа-В и протеин-активатор-1.

"Нам удалось  установить новые молекулярные  механизмы, за счет которых компоненты  средиземноморской диеты могут  предотвращать атеросклероз", полагают  итальянские ученые. "Вместе с  жирными кислотами, полифенолы являются  примером того, как нутриенты  могут непосредственно влиять  на экспрессию провоспалительных/проатерогенных  генов".

 Arterioscler Thromb Vasc Biol 2003;23:622-9.

Cardiosite.ru

 

 

3 апреля 2003 г. Исследователи из университета Scranton (Пенсильвания) сообщают, что клюквенный  сок содержит больше фенольных  антиоксидантов, чем остальные, более "популярные" соки. У больных  с гиперхолестеринемией клюквенный  сок существенно повышает концентрацию  липопротеинов высокой плотности.

На 225-ом ежегодном заседании Американского Химического Общества в Нью-Орлеане д-р Joe A. Vinson сообщил о результатах исследования влияния клюквенного сока на липидный обмен при гиперхолестеринемии.

Он и его коллеги после "отмывочного" периода назначали 10 пациентам до 3 порций клюквенного сока (с искусственным подсластителем) в день. Другие 10 участников получали клюквенный сок с сахаром. Прием сока продолжался 1 месяц. Каждая порция (8 унций) содержала около 27% чистого сока.

Спустя месяц уровень общего холестерина остался прежним. Однако концентрация холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) несколько снижалась на фоне 2 порций сока. Уровень холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) достоверно повышался на фоне приема 3 порций сока. Концентрация триглицеридов не менялась при приеме сока с искусственным подсластителем, но возрастала у тех участников, кто принимал до 3 порций сока с сахаром.

"Повышение  уровня холестерина ЛПВП на 10%, которое мы наблюдали, соответствует  снижению сердечно-сосудистого риска на 40% по Фрамингамской шкале", пояснил д-р Vinson.

Он также отметил, что масса тела участников снижалась в среднем на 2 фунта, независимо от того, какой сок они пили - с сахаром или без. "Вероятно, потеря веса связана с действием полифенолов, влияющих на метаболизм", предположил он, добавив, что "свободно-радикальное повреждение уменьшается уже на фоне одной порции сока в день".

 По материалам Cardiosite.ru

 

19 февраля 2003 г. Ягоды - например, клюква и черная  смородина - являются ценными источниками  антиоксидантов, предупреждающих рак  и заболевания сердца, установили  финские ученые.

Оказалось, что употребление в пищу самых обычных ягод (клюква, черника, черная смородина и др.) повышает сывороточные уровни флавоноида кверцетина. Флавоноиды, как известно, обладают антиоксидантым действием, защищая организм от свободных радикалов.

 

«Ягоды - это великолепный источник клетчатки, витамина С, различных флавоноидов и других фенольных соединений», поясняет д-р Iris Erlund в новом выпуске European Journal of Clinical Nutrition. «При этом в них мало калорий и жира. Кроме того, они делают нашу диету более разнообразной и «разноцветной», что тоже немаловажно. Ягоды, безусловно, очень полезны практически всем».

Кверцетин является одним из наиболее мощных антиоксидантов, согласно экспериментальным данным. Доказано, что он предупреждает развитие сердечно-сосудистых заболеваний. В экспериментах на животных он также предупреждал развитие рака; надежных доказательств аналогичного эффекта у людей пока не получено.

В выполненное д-ром Erlund исследование вошли 40 60-летних мужчин, в течение 8 недель рандомизированно получавших обычную или дополнительно содержащую 100 г ягод диету. В «ягодной» группе ежедневное потребление кверцетина составляло 12 мг, в группе контроля - 5.8 мг. На фоне «ягодной» диеты уровень кверцетина увеличился приблизительно на 50% по сравнению с обычной диетой.

Самыми лучшим источником кверцетина считается желтый или красный репчатый лук. В ягодах кверцетина несколько меньше, но все равно больше, чем в чае или красном вине, чаще всего называемых в качестве источников этого вещества.

Термическая обработка и замораживание разрушают многие антиоксиданты, поэтому лучше всего есть ягоды свежими. «Все-таки даже после замораживания или приготовления варенья в ягодах сохраняется достаточное количество полезных веществ», успокаивает д-р Erlund. «С другой стороны, в соках полезных веществ относительно мало, потому что последние не полностью освобождаются из ягод в процесс приготовления сока», добавляет она.

 Eur J Clin Nutr 2003;57:37-42.

Cardiosite.ru

 

24 декабря 2002 г. Новое японское исследование  показало, что употребление зеленого  чая способно уменьшить риск  инфаркта миокарда, хотя и не  влияет на риск ИБС.

«По нашим данным, среди любителей зеленого чая инфаркт миокарда (ИМ) встречается реже… Вероятно, употребление этого напитка японцами оказывает выраженный протективный эффект», полагает д-р Yukihiko Momiyama (Медицинский Колледж национальной обороны, Saitama, Япония).

В проведенное им и его коллегами исследование вошло 393 больных, проходивших диагностическую коронарографию. У большинства участников имелись такие факторы риска ИБС, как гипертония, гиперхолестеринемия, диабет. Анализ полученных данных представлен в ноябрьском выпуске American Journal of Cardiology.

Не удалось обнаружить связи между числом ежедневно выпиваемых чашек зеленого чая, с одной стороны, и риском или тяжестью ИБС, с другой стороны. Тем не менее, среди лиц, выпивавших как минимум одну чашку в день, риск ИМ был на 42% меньше, чем среди тех, кто вообще не употреблял этот напиток.

Десятилетиями ученые пытались определить, почему в Японии распространенность ИБС гораздо ниже, чем на Западе. По всей видимости, существует множество факторов, обусловливающих это различие. Однако ряд исследователей ведущую роль отводит именно употреблению зеленого чая.

Как известно, зеленый чай богат флавоноидами, нейтрализующими свободные радикалы и тем самым уменьшающими риск ИБС и инсульта. Ранее было установлено, что при достаточном потреблении флавоноидов меньше риск смерти от ИБС, а также риск ИМ.

Am J Cardiol 2002;90:1150-3.

Cardiosite.ru

 

2. Материалы и методы

2.1.  Первичное исследование растительного  сырья.

Работу с любым новым растением целесообразно начинать на небольшой навеске сырья с подбора оптимального экстрагента и предварительной оценки состава БАВ из извлечений капельным или экспресс-хроматографическим методом с использованием специфических реакций на основные группы природных соединений.

Для этого берут навески измельченного растительного сырья, просеянного сквозь сито, заливают разнополярными экстрагентами в соотношении 1:10 (вода, 10 %, 30 %, 50 %, 70 %, 96 % спирт, ацетон и 50 % водный ацетон, этилацетат, хлороформ, бензол (пентан, гексан, гептан, толуол)) и оставляют настаиваться (с перемешиванием или без) в течение 1-3 дней при комнатной температуре.

Перечисленные экстрагенты являются оптимальными для определения "возможных" групп извлекаемых соединений растений (гликозиды, агликоны, сложные эфиры, соединения, содержащие группы ОН, С=О, СООН, NH(NH2) жирного и ароматического ряда, неполярные и высокомолекулярные вещества). Вместо этилового спирта или в дополнение к нему можно использовать метиловый или другие спирты, диоксан, этиленгликоль, формамид, кислоты, основания, что расширяет информацию о составе групп веществ в растении.

Извлечения, полученные при комнатной температуре, оценивают по качественному составу групп БАВ и количественному содержанию экстрактивных веществ. Для этого из каждого извлечения на фильтровальную бумагу наносят пятна извлечений (не менее 10 точек каждого извлечения на расстоянии 1-1.5 см друг от друга, d = 0.5 см). Отбирают аликвоту каждого извлечения, испаряют в предварительно взвешенной фарфоровой чашке, доводят до постоянного веса и определяют количество экстрактивных веществ, извлекаемых каждым растворителем без нагревания.

Затем все извлечения одновременно нагревают на кипящей водяной бане в течение одного часа и повторяют описанную выше процедуру нанесения проб на бумагу и определения количества экстрактивных веществ после нагревания, т. е. оценивают изменения в интенсивности окраски пятен и количестве экстрактивных веществ, получаемых во всех вариантах извлечений при нагревании.

После проведения обязательных реакций на основные группы БАВ (таблица 1.1) и оценки группового состава БАВ в полученных извлечениях, изучают компонентный состав, используя метод восходящей одномерной бумажной хроматографии в присутствии веществ-стандартов на разные обнаруженные группы БАВ, сравнивая их в видимом и УФ-свете, по величинам Rf и цвету пятен от действия специфических проявителей [8].

Таблица 1.1 – Обязательные реакции на основные группы БАВ

№ п/п	Реактив	Основные группы БАВ
1	NH3 (в парах или растворе)	С=О содержащие соединения (флавоноиды, пигменты, антоцианы, антрахиноны, халконы, ауроны, ксантоны и др.)
2	NaOH (КОН)	Антрацены, халконы, ауроны
3	FeCl3 (1-5 % водные или спиртовые)	Фенольные соединения
4	А1С13, (1-5 % водные или спиртовые)	Флавоноиды и другие фенольные соединения с рядовым расположением ОН-групп или сочетание рядом стоящих С=О и ОН-групп
5	Железоаммониевые квасцы (1 % водный раствор)	Дубильные вещества (гидролизуемого и конденсированного типов)
6	Ванилин в концентрированной соляной или серной кислоте	Катехины, конденсированные дубильные вещества, антоцианы
7	о-Толуидин	Альдозы (углеводы)
8	Нингидрин	Аминокислоты, аминосахара, алкалоиды с NH2 и NH-rpyппами
9	Реактив Драгендорфа (или фосфорно-вольфрамовая кислота)	Алкалоиды
10	"Лактонная" проба	Кумарины
11	Проба на "пенообразование" (делается в растворе)	Сапонины

 

В результате при небольшом расходе сырья и экстрагентов решается несколько задач:

-подбор оптимального экстрагента (по качественному составу извлекаемых групп БАВ и количеству экстрактивных веществ);

-подбор режима экстракции (без температуры или с нагреванием) по результатам изменений в интенсивности окраски, по качественным реакциям на основные группы БАВ и степени их извлечения. Рекомендуется использовать не менее 10 реакций, поскольку в извлечениях могут присутствовать вещества, мешающие друг другу при их качественном определении в составе одного извлечения;

-суммарная информация может служить основой для разработки технологической схемы выделения целевых веществ

2.2. Хроматографические методы идентификации  флавоноидов.

Избирательная экстракция для флавоноидов имеет важное значение, в связи с широким использованием для их разделения и очистки различных вариантов хроматографического метода.

В настоящее время используют различные варианты хроматографического метода. Наиболее важной в качественном анализе является распределительная хроматография на бумаге. Тонкослойный вариант удобен для разделения ароматических оксикислот и метилированных флавоноидов, которые с трудом делят на бумаге.