Газохрамтографический анализ витамина Е

       Альфа-ТОКОФЕРОЛА АЦЕТАТ (ФС 42-0284-07)

 

Витамин Е ацетат

 

(2RS)-6-Ацетокси-2,5,7,8-тетраметил-2-(4,8,12-триметилтридецил)хроман

 

    C31H52O3                                                     М.м.

472,8

 

Содержит не менее 96,5% и не более 101,0% C31H52O3.

 

Описание. Бесцветная или слегка желтая или зеленовато-желтая прозрачная, вязкая,

маслянистая жидкость с характерным запахом.

 

Растворимость. Легко растворим в спирте 96%, ацетоне и растительных маслах, практически

нерастворим в воде.

 

    Подлинность.  Инфракрасный спектр жидкой пленки  субстанции в

области от

 

                 -1

 

4000  до  400  см    по  положению  полос поглощения должен

соответствовать

 

рисунку спектра альфа-токоферола ацетата (Приложение 1).

 

Ультрафиолетовый спектр поглощения 0,01% раствора субстанции в спирте 96% в области от

230 до 350 нм  должен иметь максимумы при 278 нм, 284 нм и минимум при 254 нм.

 

Прозрачность раствора. Раствор 0,1 г субстанции в 10 мл спирта 96% должен быть прозрачным

или выдерживать сравнение с эталоном I.

 

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен

выдерживать сравнение с эталоном Y7.

 

 

Кислотное число. Не более 1,0. Определение проводят из точной навески около 2 г субстанции.

 

альфа-Токоферол. Около 0,15 г (точная навеска) субстанции растворяют в 100 мл смеси серная

кислота концентрированная - этанол (3:200), прибавляют 20 мл воды, 0,1 мл раствора дифениламина

с концентрацией 2,5 г/л в серной кислоте и титруют при постоянном перемешивании 0,01 М

раствором церия(IV) сульфата до появления сине-фиолетового окрашивания, устойчивого в течение

10 с.

 

Параллельно проводят контрольный опыт.

 

1 мл 0,01 М раствора  церия(IV) сульфата соответствует 2,154 мг свободного альфа-токоферола,

которого должно быть не более 1,0% в субстанции.

 

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1,0 г (точная навеска) субстанции не

должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в

субстанции).

 

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные

органические растворители".

 

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая

чистота".

 

Количественное определение. Определение проводят методом ГХ.

 

Раствор внутреннего стандарта. Около 1 г (точная навеска) дотриаконтана помещают в мерную

колбу вместимостью 100 мл, растворяют в гексане, доводят объем раствора гексаном до метки и

перемешивают.

 

Испытуемый раствор. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу

вместимостью 50 мл, растворяют в 10 мл раствора внутреннего стандарта, доводят объем раствора

гексаном до метки и перемешивают.

 

Стандартный раствор. Около 0,1 г (точная навеска) стандартного образца альфа-токоферола

ацетата (стандарт ВР или аналогичного качества) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл,

растворяют в 10 мл раствора внутреннего стандарта, доводят объем раствора гексаном до метки и

перемешивают.

 

Контрольный раствор. 0,1 г субстанции растворяют в 50 мл гексана.

 

    Хроматографические условия

 

    Колонка                    - силанизированная  стеклянная  длиной

2-3 м

 

                                 и внутренним диаметром 2,2-4,0 мм;

 

    Сорбент                    - 2-5%  полидиметилсилоксана  (напр.,

OV-1,

 

                                 SE-30)  на силанизированном

диатомитовом

 

                                 носителе  (например, хромосорб  W-

AW-DMCS,

 

 

 

 

                                 хроматон N-AW-DMCS), от 125-150 до

150-180

 

                                 меш.;

 

    Температура  колонки        - 245-280 град. С;

 

    Температура  детектора      - 270-300 град. С;

 

    Температура  испарителя     - 270-300 град. С;

 

    Скорость  газа-носителя     - 25-90 мл/мин.;

 

    (азот)

 

    Детектор                   - пламенно-ионизационный;

 

    Объем  пробы                - 1 мкл.

 

Хроматографируют стандартный раствор и регулируют температуру колонки и скорость газа-

носителя, чтобы разрешение (R) между пиками альфа-токоферола ацетата и дотриаконтана было не

менее 1,4.

 

Хроматографируют стандартный раствор до тех пор, пока относительное стандартное

отклонение для отношения площади пика альфа-токоферола ацетата к площади пика дотриаконтана

на 5 последовательных хроматограммах будет не более 2,0%.

 

Рассчитывают относительный поправочный коэффициент (К) для площади пика альфа-

токоферола ацетата по формуле:

 

                                  S  x a

 

                                   д    0

 

                              К = ---------,

 

                                   S  x a

 

                                    0    д

 

    где:  S  -  средняя  площадь   пика  дотриаконтана   на

хроматограммах

 

           д

 

стандартного раствора;

 

    S  -  средняя  площадь пика альфа-токоферола ацетата  на

хроматограммах

 

     0

 

стандартного раствора;

 

    a  -  навеска  дотриаконтана  в пересчете на 10 мл раствора

 

 

 

 

внутреннего

 

     д

 

стандарта, в граммах;

 

    a  - навеска стандартного образца альфа-токоферола ацетата, в

граммах.

 

     0

 

    Хроматографируют    контрольный    раствор.   Если   на 

хроматограмме

 

детектируется   пик   с   временем   удерживания,  соответствующим

времени

 

удерживания  пика  дотриаконтана,  и его площадь составляет 0,5% и

более от

 

площади пика альфа-токоферола ацетата, при окончательном расчете

результата

 

                                                                    

(и)

 

испытания  используют  исправленную площадь пика дотриаконтана

(S       ),

 

                                                                

исп.

 

которую рассчитывают по формуле:

 

                                         (к)    (и)

 

                                        S    x S

 

                                         x      1

 

                           (и)    (и)

 

                      S        = S   - -----------,

 

                       исп.                (к)

 

                                          S

 

                                           1

 

           (и)

 

    где:  S     -  площадь  пика  дотриаконтана на хроматограмме

испытуемого

 

раствора;

 

      (и)

 

 

 

 

    S       -   площадь  пика  альфа-токоферола  ацетата  на

хроматограмме

 

     1

 

испытуемого раствора;

 

      (к)

 

    S      -  площадь пика со временем  удерживания, соответствующим

времени

 

     х

 

удерживания пика дотриаконтана, на хроматограмме контрольного

раствора;

 

      (к)

 

    S       -   площадь  пика  альфа-токоферола  ацетата  на

хроматограмме

 

     1

 

контрольного раствора.

 

Хроматографируют испытуемый раствор.

 

Содержание C31H52O3 в субстанции в процентах (X) рассчитывают по формуле:

 

                               (и)

 

                             S     x К x a  x 100

 

                              1           д

 

                        X = ----------------------,

 

                                     (и)

 

                                S        x a

 

                                 исп.       1

 

            (и)

 

    где:  S      -  площадь  пика  альфа-токоферола ацетата на

хроматограмме

 

           1

 

испытуемого раствора;

 

    К   -   относительный   поправочный   коэффициент   для 

площади  пика

 

альфа-токоферола ацетата;

 

 

 

 

         (и)

 

    S         -  исправленная  площадь  пика  дотриаконтана на

хроматограмме

 

     исп.

 

испытуемого раствора;

 

    а  -  навеска  дотриаконтана  в пересчете на 10 мл раствора

внутреннего

 

     д

 

стандарта, в граммах;

 

    a  - навеска субстанции, в граммах.

 

     1

 

Хранение. В сухом, защищенном от света месте.