Т-2-токсин: 0,05 мг/кг корма,
ДОН-токсин: 3,33 мг/кг корма.
Суммарное содержание продуктов
микробиосинтеза: паприна (БВК, дрожжи
на нефтепарафинах), гаприна (БВК, дрожжи
на природном газе), гиприна (гидролизные,
кормовые дрожжи) - 5 % массы корма,
Для лососевых рыб МДУ на афлатоксины
не разработаны.
радужная форель наиболее чувствительна
к афлатоксинам;
афлатоксин B1 (0,03 - 0,06 мг/кг корма)
вызывает массовую гибель мальков;
концентрации 0,5-1,0 мг/кг корма
вызывают образование опухоли печени;
афлатоксины В2, G1 и G2 встречаются
в кормах реже и в меньших концентрациях,
чем афлатоксин В1 они также уступают ему
в токсичности и канцерогенности;
МДУ на госсипол для рыб не разработаны.
Доза 0,1 г/кг - вызывает изменения
гематологических показателей и нарушает
процесс синтеза белка; доза 0,3 г госсипола
на 1 кг корма подавляет рост рыб.
Определение токсичности фуражного
зерна, продуктов его переработки и комбикормов
с использованием рыб-гуппи. При санитарной
оценке концентрированных кормов их необходимо
исследовать на токсичность, которая может
быть обусловлена за счет наличия в кормах
химических соединений и микотоксинов.
Для этой цели в соответствии с ГОСТ отбирают
средние пробы кормов и отправляют в лабораторию
на исследование, при котором определяют
общую токсичность и присутствие микотоксинов.
Определение общей
токсичности.
Исследования проводят по Методике,
утвержденной ГУВ МСХ России. Принцип
методики основан на извлечении из фуражного
зерна, продуктов его переработки, комбикормов
ацетоном жиро- и водорастворимых фракций
токсических веществ и последующем воздействии
этих фракций на аквариумных рыб-гуппи.
Методика позволяет определить
токсичность концентрированных кормов
в течение суток без учета времени подготовки
образцов для тестирования.
Пробу фуражного зерна (ячмень,
овес, пшеница, горох, кукуруза, просо)
50 г тщательно измельчают на лабораторной
мельнице (отруби и комбикорма экстрагируют
без измельчения), помещают в плоскодонную
колбу с притертой пробкой, заливают 150
мл ацетона и экстрагируют при встряхивании
на шуттель-аппарате в течение двух часов.
Экстракт фильтруют через бумажный
фильтр в фарфоровую чашу и выпаривают
под тягой на водяной бане (Т 55-60°) досуха.
Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона
и переносят его в химический стакан (емкостью
700-800 мл, диаметром 11-15 см) с 500 мл воды из
аквариума комнатной температуры (17-20°).
Экстракты из комбикормов, кукурузы, гороха
и проса после растворения в воде помещают
в бытовой холодильник на 40-45 мин. при Т
6-7°С, по истечении срока экстракты фильтруют
через небольшой слой ваты, подогревают
до исходной температуры (17-20°).
В воду с экстрактом помещают
5 рыб-гуппи независимо от пола, возраста,
за которыми ведут наблюдение, отмечая
их гибель через 24 часа (гуппи, вышедшие
из опыта, выбраковываются).
Примечание. Если фуражное зерно,
продукты его переработки и комбикорм
окажутся токсичными, такие партии кормов
немедленно исключаются из рациона и проводят
дополнительные дифференциальные исследования
на хлор- и фосфорорганические соединения,
препараты ртути, алкалоиды (по ранее разработанным
методикам) и микотоксины.
Определение микотоксинов
Методика основана на извлечении
микотоксинов из фуражного зерна, продуктов
его переработки комбикормов, частичной
очистки экстракта гексаном от липидов
и некоторых неполярных хлор- и фосфорорганических
соединений с последующей переэкстракцией
микотоксинов хлороформом и исследованием
на рыбах-гуппи. Методика позволяет определить
токсичность в течение 24-30 часов.
Пробу фуражного зерна 50 г тщательно
измельчают на лабораторной мельнице
(отруби и комбикорма экстрагируют без
измельчения), помещают в плоскодонную
колбу с притертой пробкой, заливают 150
мл ацетона и экстрагируют при встряхивании
на шуттель-аппарате в течение двух часов
или в статическом состоянии - 20 часов.
Экстракт фильтруют через бумажный обеззоленный
фильтр в фарфоровую чашку и упаривают
под тягой на водяной бане (55-60°) до объема
45-50 мл.
Остаток переносят в делительную
воронку, в которую добавляют 10 мл воды.
Содержимое чашки смывают 5 мл ацетона,
сливают в делительную воронку и встряхивают
одну минуту. Затем в воронку вносят 50
мл гексана и встряхивают 1-2 минуты. После
разделения слоев - нижний сливают в другую
делительную воронку и дважды экстрагируют
40 мл хлороформа (в каждом случае встряхивают
две минуты). Гексановую фракцию, при необходимости,
исследуют на хлор и фосфорорганическое
соединения. После разделения слоев хлороформные
фракции (нижний слой) сливают в фарфоровую
чашку и упаривают под тягой на водяной
бане (55-60°) до исчезновения хлороформа
(досуха). Сухой остаток растворяется 5
мл ацетона и переносят его в химический
стакан с 500 мл воды (17-20°), взятой из аквариума.
В раствор экстракта помещают пять гуппи
независимо от пола и возраста, за которыми
ведут наблюдение, отмечая их гибель через
24 часа. Для повышения биологической достоверности
результатов численность тест-организмов
необходимо увеличить до 10 штук, то есть
проводить биоанализ в двух повторностях.
Определение токсичности кормов
с использованием инфузории Тетрахимена
пириформис. Работу проводят следующим
образом. Взятые на анализ пробы кормов
тщательно перемешивают и растирают в
ступке. Берут ряд навесок (не меньше 3
- 5) в количествах, обратно пропорциональных
предполагаемой токсичности, но не более
300 мг в наибольшей по массе навеске. Их
вносят в пробирки или флаконы и заливают
по 2 мл чистой кипяченой воды, закрывают
резиновыми пробками с вырезкой для доступа
воздуха, что предотвращает выбрасывание
пробок при нагревании флаконов. Прогревают
в водяной бане (или стерилизаторе) 15-20
мин. при температуре 80-90°С. После охлаждения
до комнатной температуры во флаконы вносят
по 0,05 мл культуры Тетрахимены пириформис,
разведенной перед этим водой в 10 раз,
и ставят в термостат при +25°С или в обычный
шкаф в затемненное место при комнатной
температуре на 1-4 суток.
Наличие роста, его степень
контролируют каждые сутки под микроскопом
(МБС - микробиологический стереоскопический)
при увеличении 2х8. Это позволяет просматривать
пробы прямо в пробирке или флакончике,
не беря их пипеткой, что является предварительным
контролем, за которым следует просмотр
в капле под МБИ (увеличение 7х90). Каплю
берут на предметное стекло пастеровской
пипеткой или стеклянной палочкой, просматривают
весь объем, все слои. Контролем является
водопроводная, дехлорированная путем
кипячения вода, в которую одновременно
с опытом также засевают культуру инфузорий.
Угнетение подвижности, наличие
гибели, даже единичных особей или их деформации
свидетельствует о токсичности или другой
вредности исследуемого материала. Определенную
вредность продукта характеризует замедление
роста и размножения инфузорий. Для этого
на 4-е сутки производят количественный
учет выросших особей в счетной камере
Фукс-Розенталя или Горяева, но чаще всего
ограничиваются примерным учетом погибших
особей путем просмотра капли среды в
трехкратной повторности, наличием каких-либо
отклонений в подвижности и внешним виде
инфузорий.
Целесообразно делать и подсчет
выросших особей. Для этого во все флаконы
вносят по 3 мл фиксирующего раствора,
например, формалина, приготовленного
по следующей прописи: 20 мл 33% формалина,
175 мг КН2Р04, 170 мг К2НР04 и 440 мл дистиллированной
воды. Количество инфузорий в каждом флаконе,
соответствующем разведению (титру) корма,
выражают в процентном отношении к контролю
(засеянному на стандартную среду, разведенную
водой в 10 раз) и выдержанному в то же самое
время, что и опыт. На основании полученных
цифр проводят соответствующие расчеты
угнетения роста и гибели по правилам
общей токсикологии. При необходимости
используют и полулогарифмическую сетку
пробит-анализа.
Кроме того, пробы, не показавшие
гибели или других патологических изменений
Тэтрахимены в течение 1-4 суток, оставляют
на дальнейшую инкубацию до 7 суток для
выявления возможной кумуляции, т.е. накопления
токсического эффекта, характеризующегося
замедлением развития, частичной гибелью
и другими изменениями жизнедеятельности
данного тест-объекта. Их наличие также
выражают в баллах или в процентах от количества
особей в опыте и по отношению к контролю.
Культурная стандартная среда
для тетрахимены пириформис: 2 г пептона
бактериологического; 0,5 г глюкозы; 0,1 г
дрожжевого экстракта; 0,1 г морской соли
аптечной (или 0,1 г NaCI) на 100 мл дистиллированной
воды. Среду подвергают автоклавированию
при 0,5 атм. 30 мин. или в кипящей водяной
бане 1 час. Хранят в темном месте, т.к. на
свету питательные компоненты разлагаются.
Слой среды не должен превышать 1,5-2 см.
Культуру поддерживают путем пересева
каждые 7-10 суток на новую среду.
Экспресс-метод определения
общей токсичности фуражного зерна, продуктов
его переработки и комбикормов с использованием
инфузорий стилонихий.
Экспресс-метод основан на качественном
и количественном определении реакции
инфузорий стилонихий на действие различных
фракций токсических веществ (бактериальной,
грибковой и химической природы), извлекаемых
ацетоном из исследуемого продукта, совместно
с действием мелкодисперсной взвеси продукта,
находящейся в его водно-ацетоновом растворе.
Токсический эффект оценивается через
1 час, при этом одновременно проводятся
качественный и количественный анализ.
В первую очередь осуществляется качественный
анализ. Визуально, с помощью микроскопа
МБС-10 (увеличение 2х8), оценивается подвижность
инфузорий во всех тестируемых пробах
(комбикорма или их компоненты). При отсутствии
токсичности инфузории подвижны. В токсичных
пробах инфузории неподвижны. Далее проводят
количественный анализ в пробах с неподвижными
инфузориями. В этом случае токсический
эффект оценивается по проценту гибели
инфузорий, который пропорционален степени
токсичности продукта. Погибшие организмы
полностью распадаются (лизируются), что
облегчает количественный подсчет выживших
организмов.
Глава 2. Профилактика
токсикозов рыб.
Профилактика
отравлений рыб входит как. важнейшее
звено в комплекс мероприятий по охране
водной среды от загрязнения сточными
водами, включающий строгое выполнение
принятых государственных законов и постановлений,
четкое взаимодействие работы различных
водопользователей и контролирующих органов,
а также постоянное научно-техническое
совершенствование методов очистки и
контроля чистоты вод. Регулирование использования
и охрану вод от загрязнения возложено
на Государственный комитет СССР по охране
природы (Госкомприрода СССР) и его органы
на местах. Он осуществляет государственный
контроль за использованием и охраной
земель, поверхностных и подземных вод,
атмосферного воздуха, растительного
и животного мира (в том числе рыбных запасов),
морской среды и природных ресурсов территориальных
вод СССР, утверждает экологические нормативы,
правила и стандарты по охране природной
среды от загрязнения, выполняет другие
задачи по управлению природоохранной
деятельностью в стране.
Большую
роль в разработке мероприятий по предотвращению
отравлений рыб и по охране водоемов от
загрязнения играет и ветеринарная служба.
В задачи ветеринарных органов входят
паспортизация рыбохозяйственных водоемов
и учет источников загрязнения, анализ
имеющихся данных по уровню загрязнения
и выборочный контроль за наличием остаточных
количеств различных токсических веществ
в воде, органах рыб и других объектах,
диагностика отравлений, ветеринарно-санитарная
экспертиза отравленной или загрязненной
рыбы, а также разработка совместно с вышеуказанными
министерствами и ведомствами мероприятий
по профилактике токсикозов рыб и обеспечению
выращивания в водоемах доброкачественной
пищевой продукции.
При
разработке и осуществлении профилактических
мер ветеринарные специалисты должны
руководствоваться государственными
законами по охране природы, Ветеринарным
уставом Союза ССР, официальными документами
Главного управления ветеринарии Госагропрома
СССР.
Одним
из важнейших профилактических мероприятий
является контроль за выполнением “Правил
охраны поверхностных вод от загрязнения
сточными водами”, утвержденных Министерством
мелиорации и водного хозяйства, Минздравом
и Министерством рыбного хозяйства СССР
от 16 мая 1974 г. № 1166.
В Правилах
определены критерии оценки степени загрязненности
вод, требования и нормативы пригодности
поверхностных вод для различных целей,
технические условия отведения сточных
вод, порядок контроля эффективности очистки
сточных вод и ответственность за нарушение
правил. Основные положения и требования
Правил заключаются в следующем.
Критерием
загрязненности воды (водоема) являются
ухудшение ее органолептических свойств
и появление вредных веществ для человека,
животных, птиц, рыб, кормовых и промысловых
организмов, а также повышение температуры
воды, изменяющей условия для нормальной
жизнедеятельности водных организмов.
В качестве допустимых пределов ухудшения
качества воды водоемов служат нормативы
предельно допустимых концентраций (ПДК)
загрязнений (санитарно-гигиенические
или рыбохозяйственные). В случаях комплексного
использования водных объектов при определении
условий спуска сточных вод исходят из
более жестких требований (ПДК).
Требования
Правил распространяются на все виды производственных,
хозяйственно-бытовых сточных вод, поступающих
из различных промышленных предприятий,
населенных пунктов, промыслов, с обрабатываемых
ядохимикатами и удобрениями сельскохозяйственных
угодий, орошаемых и осушаемых земель
и других объектов независимо от их ведомственной
принадлежности. Запрещается допускать
в водоемы утечку от нефтепроводов и нефтепромыслов,
стоки из плавучих средств водного транспорта,
а также сбрасывать сточные воды, которые
могут быть использованы для оборотного
водоснабжения или на других предприятиях
и для орошения сельхозугодий. Они содержат
ценные производственные отходы (сырье,
реагенты, полупродукты) и вещества, для
которых не установлены ПДК.
Условия
спуска очищенных сточных вод определяются
с учетом степени возможного их смешивания
и разбавления в природных водоемах, а
также качества воды вышележащих участков.
При этом для каждого предприятия или
объекта устанавливается лимит по расходу
сточных вод (предельно допустимые выбросы
— ПДВ) и концентрации содержащихся в
них примесей.