Валидационная оценка методов качественного и количественного анализа ингредиентов лекарственного средства: Рибоксина в таблетках по0,2г

Лекарственная форма.

Таблетки по 0,2 г активного вещества № 50. 
Фармакотерапевтическая группа.

Метаболическое средство. 
Фармакологические свойства.

Метаболическое средство, предшественник аденозинтрифосфата; оказывает антигипоксическое, метаболическое и антиаритмическое действие. Повышает энергетический баланс миокарда, улучшает коронарное кровообращение, предотвращает последствия интраоперационной  ишемии почек. Принимает непосредственное участие в обмене глюкозы и  способствует активизации обмена в  условиях гипоксии и при отсутствии аденозинтрифосфата. 
Показания к применению.

Рибоксин применяют для лечения сердечно-сосудистых заболеваний (ишемия, инфаркт миокарда, нарушение ритма и др.) в виде таблеток, покрытых оболочкой по 0,2 г.Срок годности 2 года.

Противопоказания.

Повышенная чувствительность к  составляющим компонентам препарата. Гиперурикемия, подагра. При почечной недостаточности прием препарата  ограничить.

 

Взаимодействие с другими  препаратами.

В сочетании с бета-адреноблокаторами  эффективность препарата не снижается. В сочетании с сердечными гликозидами рибоксин может предотвращать развитие аритмии, а также усилить ионотропное действие.

 

 

Побочные эффекты.

Возможно возникновение зуда и гиперемии кожи. В одиночных случаях возможно повышение уровня мочевой кислоты в крови. При длительном лечении препаратом возможно обострение подагры.

 

Передозировка.

Зуд, гиперемия кожи. Необходимо провести десенсибилизирующую терапию.

Международное непатентованное  название.

Инозин

Фирма производители.

Биосинтез (Россия) 

Хранение.

Рибоксин следует хранить в сухом защищённом от света месте, при комнатной температуре.

Хранение и применение меркаптопурина и азатиоприна.

 Меркаптопурин- антилейкемическое средство, его назначают внутрь в виде таблеток по 0,05г. при остром лейкозе, хроническом миелолейкозе и других злокачественных заболеваниях.

Азатиоприн оказывает иммунодепрессивное действие, он используется для подавления тканевой несовместиности при пересадке  органов. Выпускают таблетки по 0,05 г.

Хранят меркаптопурин и азатиоприн в хорошо укупоренной таре, а азатиоприн в защищённом от света сухом месте. Следует соблюдать осторожность при работе с меркаптопурином , избегая  его попадание на кожу и в дыхательные  пути.

 

 

Глава II. Экспериментальная часть. Валидационная оценка методики качественного  и количественного определения рибоксина в таблетках (0,2 г.)

§2.1. Определение специфичности  методики качественного анализа  рибоксина в таблетках

Специфичность – способность методики достоверно определить анализ соединения в присутствии других компонентов  образца( вспомогательного вещества), включая потенциально возможные, посторонние  вещества.

Диагностика специфичности зависит  от характера и особенности методик.

Для установления специфичности в  идентификационных тестах, основанных на качественных реакциях следует убедиться  как в отсутствии положительного эффекта реакции на сопутствующие  вещества, так и возможности ингибирования  данной реакции компонентами образца.

Если идентификация, количественное определение или контроль примесей проверяется спектральными или сепарационными методами, то необходимо проанализировать спектры, хромотограммы анализируемых веществ, а также их смесей с остальными компонентами лекарственного средства.

В том случае, если только вид анализа  обеспечивает появление сигнала  при определении длины волны( спектральный метод) или временной  точке( сепарационные методы), то использование  этого метода возможно , в противном  случае требуется выделение целевого продукта и его регистрация.

Для титриметрических методик главным  является отсутствие реакции  растворителя и сопутствующих компонентов  пробы с титрантом, а также  необходимо быть уверенным в специфичности  индикатора.

Проведём валидационную оценку методик количественного анализа  каждого ингредиента лекарственного средства по показателю специфичность. Необходимо было приготовить модельную смесь, состав которой приводится ниже. В качестве наполнителя использовали натрия хлорид.

Состав модельной смеси:

1. Рибоксин                                  0,2
2. Наполнители                            0,07

Отвешивали точное количество рибоксина, натрия хлорида и измельчали в ступке.

Для  качественного и количественного подтверждения специфичности методики идентификации рибоксина проводили спектрофотометрическое определение модельной смеси, а параллельно -субстанции рибоксина, измерив оптическую плотность и определив при какой длине волны будет максимальная оптическая плотность субстанции рибоксина и приготовленной модельной смеси (спектральный метод).

Методика приготовления раствора модельной смеси препарата для измерения оптической плотности:

Необходимо взять точную навеску  модельной смеси препарата рибоксина  в таблетках 0,2, поместить в мерную колбу, вместимостью 200 мл, затем добавить 100 мл воды очищенной, взболтать в течение 15 минут и довести водой до метки. Полученный раствор перемешать и отфильтровать. В мерную колбу,  вместимостью 100 мл переносят по 1 мл раствора и доводят водой до метки. Измеряют оптическую плотность на спекторофотометре при длинах волн 220-285 нм в кювете с толщиной слоя 1 мм. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2.Значение оптической плотности раствора модельной смеси рибоксина.

Длина волны (λ, нм)	Значение оптической плотности( А)
220	0,186
225	0,190
230	0,256
235	0,367
240	0,498
244	0,570
246	0,587
248	0,601
250	0,598
255	0,485
260	0,357
265	0,259
270	0,210
275	0,147
280	0,096
285	0,047

Параллельно готовят раствор субстанции рибоксина по аналогичной методике, представленной выше, и измеряют оптическую плотность при длинах волн 220-285 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Результаты представлены в таблице 3

Таблица 3. Значение оптической плотности раствора субстанции рибоксина.

Длина волны (λ, нм)	Значение оптической плотности( А)
220	0,134
225	0,135
230	0,183
235	0,269
240	0,349
244	0,396
246	0,407
248	0,416
250	0,413
255	0,308
260	0,245
265	0,180
270	0,139
275	0,105
280	0,065
285	0,035

На осовании данных таблицы 2 , мы видим  что максимальное значение оптической плотности модельной смеси рибоксина  наблюдается при  λ=248 нм.Анализируя данные из 3 таблицы : максимальное значение оптической плотности субстанции рибоксина наблюдается при той же длине волны λ=248 нм.

Заключение: таким образом ,полученные результаты соответствует требованию валидации по показателю специфичность качественного и количественного анализа.

§2.2.Определение линейности рибоксина в таблетках

Линейность методики – наличие  прямой пропорциональной зависимости  аналитического сигнала ( оптической плотности  или объёма титранта то концентрации определяемого вещества в анализируемой  пробе.

Линейность выражается подчиненностью зависимости измерений характеристики и определённой величины уравнению:

 y= ax +b – линейная регрессия,

где b- отрезок, отсекаемой на оси ординат, которой соответствует значению холостого опыта;

а – наклон градуироворочной кривой и является отражением чувствительности методики..

Расчёт коэффициентов проводят по формулам:

 

 

 

 

 

 

Линейность также подтверждается градуировочным графиком зависимости  аналитического сигнала от концентрации.

Для построения градуировочного графика  готовятся серия растворов ( 5 опытов) и стандартного образца с определённой и различной концентрацией ( данные приведены в таблице 5).

Методика приготовления растворов:

В мерную колбу, вместимостью 200 мл вносят точную навеску стандартного образца ( около 0,2) добавляют 1000 воды, взбалтывают  и доводят водой до метки. В  мерную колбу, вместимостью 100 мл вносят последовательно 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 мл раствора А и доводят водой до метки. Получают растворы рибоксина с концентрацией 0,0005%; 0,001%; 0,0015%; 0,002%; 0,0025%.

Измеряют оптическую плотность  каждого раствора на спектрофотометре при длине волны 249 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения  – вода очищенная. Полученные результаты заносят в таблицу 4.

Таблица4.Результаты определения оптической плотности ит концентрации. Расчёты.

 x- концентрация;y – аналитический сигнал ( оптическая плотность);

xi	yi	xiyi	xi2	yi2
0,0005	0,262	0,000131	0,00000025	0,06864
0,001	0,558	0,000558	0,000001	0,311364
0,0015	0,772	0,001158	0,00000225	0,59598
0,002	1,010	0,00202	0,000004	1,0201
0,0025	1,167	0,002917	0,00000625	1,3618
Σ0,0075	Σ3,769	Σ0,006784	Σ0,00001375	Σ3,35794

 

Строят градуировочный график зависимости  оптической плотности от концентрации, рассчитывают уравнение градуировочного  графика и коэффициент корреляции.

Таблица5. Зависимость оптический плотности от концентрации.

Объём 0,1% раствора, мл	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5
Концентрация полученного раствора, %	0,0005	0,001	0,0015	0,002	0,0025
Оптическая плотность	0,262	0,558	0,772	1,010	1,167

 

Расчёт коэффициентов а и в:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Основной характеристикой линейности является коэффициент корреляции, мера взаимосвязи изменяемых явлений (взаимосвязь).

 

 

 

 

 

 

 

Заключение.

 Для аналитический целей  можно использовать только ту  методику для которой зависимость  функций от аргумента коррелируется   с коэффициентом r,который должен быть ≥0,99.

Таким образом ,полученные результаты соответствует требованию валидации по показателю линейность.

§2.3.Определение прецизионности рибоксина в таблетках спектрофотометрическим методом.

Прецизионность – характеристика случайного процесса рассеянности результатов.

Данная характеристика бывает трёх уровневая:

1. Повторяемость( Сходимость);
2. Внутрилабораторная сходимость;
3. Межлабораторная воспроизводимость.

Однако для целей фармацевтического  анализа бывает достаточно внутрилабораторной воспроизводимости.

При установлении воспроизводимости  существуют 2 способа её оценки:

1. Не менее 9ти определений, охватывающих диапазон применения методики, например, 3 разных концентрации.
2. Не менее 6ти определений для образца с содержанием анализируемого вещества близким к номинальному.

Для определения прецизионности готовится  модельная смесь ( с точным содержанием  действующих веществ) соответствующих  прописи.

Из модельной смеси готовят 9 растворов на 3х уровнях концентраций ( с разными навесками) по 3 одинаковых раствора.