Водорастворимые витамины (производные пиррола, бензопирана, фурана)

Витамин U (S-метилметионин) - группа витаминоподобных веществ (метилметионинсульфоний и метилметионинсульфония хлорид), участвующих в обмене веществ в качестве источника свободных метильных групп и оказывающих липотропное действие, аналогичное действию метионина, холина и бетаина. В связи с выраженной антигистаминной активностью и благоприятным влиянием на заживление язв витамин U применяют для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, хронических гастритов. Этот витамин способствует восстановлению секреторной и моторной функции желудка, уменьшению воспаления слизистой оболочки пищеварительного тракта, улучшению функции железистого эпителия, нормализации кислотности желудочного сока и секреторной функции поджелудочной железы. Действие витамина U основано на том, что он метилирует гистамин, превращая его в неактивный метилгистамин, который обладает болеутоляющим и антисклеротическим свойством. При коронарном атеросклерозе препарат улучшает липидный и электролитный обмен, способствует нормализации обмена калия и натрия и улучшению сердечной деятельности. Суточная потребность в этом витамине не установлена.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.История открытия водорастворимых витаминов

Во второй половине XIX века считалось, что пищевая ценность продуктов  определяется содержанием в них  белков, жиров, углеводов, минеральных солей и воды.  Первым выделил витамин в кристаллическом виде польский ученый Казимир Функ в 1911 году. Год спустя он же придумал и название - от латинского "vita" - "жизнь".

В 1896 году английский врач Эйкман заметил, что куры, питавшиеся полированным рисом, страдали нервным заболеванием, напоминавшим бери-бери у людей. После дачи курам неочищенного риса заболевание прекратилось. Он сделал вывод, что витамин содержится в оболочке зерен. В 1911 году польский ученый Казимир Функ выделил витамин в кристаллическом виде. Окончательное строение витамина В1 установлено в 1973 году и осуществлен его синтез.

Никотиновая кислота известна химикам  давно, но только в 1937 году она была выделена из экстрактов печени и названа  витамином РР (с итальянского - предохраняющая от пеллагры). Высшие растения и микроорганизмы способны синтезировать никотиновую  кислоту. У жвачных она вырабатывается микрофлорой пищеварительного тракта, биосинтез ее происходит также в  тканях животных из аминокислоты триптофан. В тканях из никотиновой кислоты  образуется ее амид, то есть витамин  В5.

Витамин В12 - это витамин 20 века. В  конце века авитаминоз В12 считался неизлечимым заболеванием, сопровождавшимся злокачественной анемией - понижением гемоглобина в крови. Предполагали, что надо лечить вытяжкой из печени, так как все витамины откладываются  в печени; приготовили препарат компакол, но это не дало нужных результатов. Расшифровал структуру витамина В12 и впервые синтезировал его химическим путем Роберт Видворт, он получил нобелевскую премию.

В середине 20 века цинга или скорбут  считалась одним их тяжелых заболеваний. Лишь в 1982 году удалось получить очищенный  препарат витамина С и позже выделить его в кристаллическом состоянии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5.Фармакопейный анализ лекарственных средств водорастворимых витаминов

 5.1.Цианкобаламин (Витамин В12)

Определение

Цианкобаламин содержит не менее 96,0 % и не более 102,0 % а-(5,6-диметилбензимидазол-1-ил)кобамида цианида в пересчете на сухое вещество.

Описание (свойства)

Темно-красный кристаллический  порошок или темно-красные кристаллы. Безводная субстанция очень гигроскопична. Умеренно растворим в воде и в 96 % этаноле, практически нерастворим в ацетоне.

Подлинность (идентификация)

А. Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях.

Испытуемый раствор. 2,5 мг испытуемого  образца растворяют в воде Р и  доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем.

Диапазон длин волн: от 260 нм до 610 нм.

Максимумы поглощения: при 278 нм, при 361 нм, а также в диапазоне от 547 нм до 559 нм.

Отношение оптических плотностей:

-  А₃₆₁/А_547-559 – от 3,15 до 3,45;

- А₃₆₁/А₂₇₈   -  от 5,4 до 5,7.

В. Тонкослойная хроматография

Испытания проводят с защитой от света.

Испытуемый раствор. 2 мг испытуемого  образца растворяют в 1 мл смеси 96 % спирт  Р – вода Р (1:1, об/об).

Раствор сравнения. 2 мг ФСО цианкобаламина растворяют в 1 мл смеси 96 % спирт Р – вода Р (1:1, об/об).

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем  силикагеля G P.

Подвижная фаза: раствор аммиака  разведенный Р1 – метанол Р  – метиленхлорид Р (9:30:45, об/об/об) (камеру не насыщают парами подвижной фазы).

Наносимый объем пробы: 10 мкл.

Фронт подвижной фазы: не менее 12 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку просматривают  при дневном свете.

Результаты: на хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается основное пятно, соответствующее по расположению, цвету и размеру основному пятну на хроматограмме раствора сревнения.

Испытания

Сопутствуюшие примеси. Жидкостная хроматография

Испытуемый раствор. 10,0 мг испытуемого  образца растворяют в подвижной  фазе и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем. Используют в течение 1 ч.

Раствор сравнения (а). 3,0 мл испытуемого  раствора доводят подвижной фазой  до объема 100,0 мл. Используют в течение 1 ч.

Раствор сравнения (b). 5,0 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой до объема 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. Используют в течение 1 ч.

Раствор сравнения (с). 25 мг испытуемого образца растворяют в 10 мл воды Р, при необходимости нагревая. Охлаждают, прибавляют 5 мл раствора 1,0 г/л хлорамина Р и 0,5 мл 0,05 М хлористоводородной кислоты, доводят водой до объема 25,0 мл, перемешивают и выдерживают в течение 5 мин. 1 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 10 мл и используют немедленно.

Условия хроматографирования:

- колонка из нержавеющей стали  длиной 0,25 м и внутренним диаметром  4 мм, заполненная силикагелем для  хроматографии Р с размером  частиц 5 мкм;

-подвижная фаза: смесь из 26,5 объемов  метанола Р и 73,5 объемов раствора 10 г/л динатрия гидрофосфата Р, доведенного до рН 3,5 кислотой фосфорной Р (раствор годен в течение 2 дней);

- скорость подвижной фазы: 0,8 мл/мин;

- спектрофотометрический детектор, длина волны 361 нм;

- объем вводимой пробы: 20 мкл;

- время хроматографирования: 3-кратное время удерживания цианкобаламина.

Пригодность хроматографической системы:

- на хроматограмме раствора сравнения (с) должны обнаруживаться два основных пика;

- разрешение: не менее 2,5 между  двумя основными пиками на  хроматограмме раствора (с);

- отношение сигнал/шум: не менее  5 для основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b).

Предельное содержание примесей:

- сумма примесей (не более 3 %): на хроматограмме испытуемого раствора сумма площадей всех пиков, кроме основного, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а). На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с площадью менее площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b) (0,1 %).

Потеря в массе при высушивании. Не более 12,0%. 20,00 мг испытуемого образца  сушат в вакууме при температуре 105^оС в течение 2 ч.

# Остаточные количества органических  растворителей. Испытуемый образец  должен выдерживать требования  статьи (5.4).

# Микробиологическая чистота. Цианкобаламин в условиях испытания не обладает антимикробным действием.

Количественное определение

25,00 мг испытуемого образца растворяют  в воде Р и доводят до  объема 1000,0 мл этим же растворителем.  Измеряют оптическую плотность  полученного раствора в максимуме  при 361 нм.

Содержание С₆₃Н₈₈СоN₁₄О₁₄Р рассчитывают с учетом удельного показателя поглощения, равного 207.

Хранение

В воздухонепроницаемом контейнере в  защищенном от света месте.

5.2.Рутозид тригидрат (рутин)

Определение

Рутозида тригидрат содержит не менее 95,0 % и не более 101,0 % 3-((6-О-(6-дезокси-а-L-маннопиранозил)-D-глюкопиранозил)окси)-2-(3,4-дигидрофенил)-5,7-дигидрокси -4Н-1-бензопиран -4-он в пересчете на безводное вещество.

Описание (свойства)

Желтый или зеленовато-желтый кристаллический  порошок. Практически нерастворим  в воде, растворим в метаноле, малорастворим в этаноле, практически нерастворим в метиленхлориде. Растворяется в растворах гидроксидов щелочных металлов.

Подлинность (идентификация)

Первая идентификация: В.

Вторая идентификация: А, С, D.

А. Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях.

Испытуемый раствор. 50,0 мг испытуемого  образца растворяют в метаноле Р, доводят до объема 250,0 мл этим же растворителем  и , при необходимости, фильтруют. 5,0 мл полученного раствора доводят  метанолом Р до объема 50,0 мл.

Диапазон волн: от 210 нм до 450 нм.

Максимумы поглощения: при 257 нм и при 358 нм.

Удельный показатель поглощения в максимуме при 358 нм: от 305 до 330 в пересчете на безводное вещество.

В. Абсорбционная спектрофотометрия в инфракрасной области.

Сравнение: ФСО рутозида тригидрата или спектр, представленный на рисунке 1.

С. Тонкослойная хроматография.

Испытуемый раствор: 25 мг испытуемого  образца растворяют в метаноле Р  и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения: 25 мг ФСО рутозида тригидрата растворяют в метаноле Р и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем  силикагеля G Р.

Подвижная фаза: бутанол Р –  кислота уксусная безводная Р – вода Р – метилэтилкетон Р – этилацетат Р (5:10:10:30:50, об/об/об/об/об).

Наносимый объем пробы: 10 мкл.

Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку опрыскивают  смесью из 7,5 мл раствора 10 г/л калия  феррицианида Р и 2,5 мл раствора железа хлорида Р1 и просматривают в течение 10 мин.

Результаты: на хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается основное пятно, соответствующее по расположению, цвету и размеру основному пятну на хроматограмме раствора сравнения.

D. 10 мг испытуемого образца растворяют в 5 мл 96 % спирта Р, прибавляют 1 г порошка цинка Р и 2 мл кислоты хлористоводородной Р1. Появляется красное окрашивание.

Испытания

Светопоглощающие примеси. Не более 0,1 в области от 450 нм до 800 нм. 0,200 г испытуемого образца растворяют в 40 мл 2-пропанола Р, перемешивают в течение 15 мин, доводят до объема 50,0 мл этим же растворителем и фильтруют.

Примеси, нерастворимые в метаноле. Не более 3 %. К 2,5 г испытуемого образца  прибавляют 50 мл метанола Р и встряхивают  в течение 15 мин при температуре  от 20^оС до 25^оС. Фильтруют при пониженном давлении через предварительно высушенный при температуре от 100^оС до 105^оС в течение 15 мин и взвешенный стеклянный фильтр (ПОР 1,6). Фильтр трижды промывают метанолом Р, порциями по 20 мл, и высушивают при температуре от 100^оС до 105^ОС в течение 30 мин. Охлаждают и взвешивают. Масса остатка на фильтре не должна превышать 75 мг.

Сопутствующие примеси. Жидкостная хроматография.

Испытуемый раствор. 0,10 г испытуемого  образца растворяют в 20 мл метанола Р и доводят подвижной фазой  В до объема 100,0 мл.

Раствор сравнения (а). 10,0 мг ФСО рутозида тригидрата растворяют в 10,0 мл метанола Р.

Раствор сравнения (b). 1,0 мл раствора сравнения (а) доводят подвижной фазой В до объема 50,0 мл.

Условия хроматографирования:

- колонка длиной ),25 м и внутренним  диаметром 4,0 мм, заполненная силикагелем  октилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;

- температура: 30^оС.

- подвижная фаза А: смесь из 5 частей тетрагидрофурана Р и  95 частей раствора 15,6 г/л натрия  дигидрофосфата Р, доведенного до рН 3,0 кислотой фосфорной Р;

- подвижная фаза В: смесь из 40 частей тетрагидрофурана Р и  60 частей раствора 15,6 г/л натрия  дигидрофосфата Р, доведенного до рН 3,0 кислотой фосфорной Р;

- скорость подвижной фазы: 1 мл/мин;

- спектрофотометрический детектор, длина волны 280 нм;

- объем вводимой пробы: 20 мкл.

Относительное удерживание ( по отношению  к рутозиду; время удерживания – около 7 мин): примесь В – около 1,1; примесь А – около 1,2; примесь С – около 2,5.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (а):

- коэффициент разделения пиков:  не менее 10 ( Н_р – высота пика примеси В относительно базовой линии; Н_v – расстояние между базовой линией и нижней точкой кривой, разделяющей пики примеси В и рутозида).

Предельное содержание примесей ( для расчета содержания примесей умножают площади пиков на соответствующие  поправочные коэффициенты: для примеси  А – 0,8; для примеси С – 0,5);

- примесь А (не более 2,0 %): на  хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси А, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b);

- примесь В (не более 2,0%): на  хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси В, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b);

- примесь С (не более 2,0%): на хроматограмме испытуемого раствора площади пика, соответствующего примеси С, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b);

- сумма примесей ( не более 4,0%): на хроматограмме испытуемого раствора сумма площадей всех пиков, кроме основного, не должна превышать 2-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с площадью менее 0,05 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (b) (0,1%).

Вода. Не менее 7,5% и не более 9,5%. Определение  проводят из 0,100 г испытуемого образца.

Сульфатная зола. Не более 0,1%. Определение  проводят из 1,0 г испытуемого образца.

# Остаточные количества органических растворителей. Испытуемый образец должен выдерживать требования статьи (5.4).