Технология ферментных препратов. Традиционные методы получения

Применяют внутривенно  при панкреатитах.

Препараты  ферментов из семенников КРС

 

РОНИДАЗА

 

Содержит фермент гиалуронидазу.

Семенники дезинфицируют 2% раствором фенола, промывают водой, снимают оболочку, измельчают.

Экстрагируют физиологическим раствором с добавлением хлороформа методом мацерации при перемешивании.

Экстракт отделяют  фильтрованием, сырье прессуют, отжим  присоединяют к экстракту.

Экстракт сублимируют  и измельчают на шаровой мельнице.

 

ЛИДАЗА

 

Содержит фермент гиалуронидазу.

Измельченные семенники  экстрагируют 0,1Н раствором кислоты уксусной в прохладных условиях методом мацерации при перемешивании.

Экстракт отделяют  фильтрованием. Из экстракта ацетоном  осаждают гиалуронидазу, которую  растворяют в воде. Процесс повторяют  трижды.

Очищенную гиалуронидазу  растворяют в воде, подвергают  стерилизующей фильтрации и сублимационной  сушке.

РОНИДАЗА. ЛИДАЗА

 

Выпускают в виде  лиофилизированного порошка во  флаконах и ампулах.

Применяют ронидазу  наружно, лидазу подкожно и внутримышечно, как средство, увеличивающее проницаемость  тканей, для лечения контрактур  суставов, послеоперационных и ожоговых  рубцов.

 

 

III. Производство  ферментов из растительного сырья

 

Использование  растительного сырья для производства  ферментов имеет

 

Преимущества:

0. Простота заготовки сырья.
1. Возможность хранения сырья длительное время без специального оборудования.
2. Компактность сухого растительного сырья.

 

Недостатки:

0. Сезонность заготовки.
4. Различное содержание ферментов в разных частях растений.

 

 Для получения  ферментов из растительного сырья  чаще используют семена растений, потому что они богаты белками и сохраняют ферментативную активность на протяжении нескольких лет.

 

 

 

 

 

(амилаза)               (ингибиторы  липазы           трипсина)          (галактозидаза)         

Технология ферментных  препаратов характеризуется индивидуальным  подходом, т.к. ферменты в растительном  сырье находятся в виде сложных  комплексов.

Общая технологическая  схема производства ферментов  из растительного сырья

 

0. Подготовка производства.
1. Измельчение сырья (вальцовые дробилки, дезинтеграторы, дисмембраторы) с целью максимального разрушения клеток.
2. Экстрагирование (экстрагенты: вода; водные растворы спиртов, ацетона, эфира, диоксана; разбавленные растворы кислот и щелочей; растворы нейтральных солей; буферные растворы; методы экстрагирования: мацерация, дробная мацерация).

Общая технологическая  схема производства ферментов  из растительного сырья

 

4. Многоступенчатая  очистка и выделение     ферментов (кислотная и температурная  денатурация, высаливание, диализ, фракционирование  органическими растворителями и  нейтральными солями, сорбция, ионообменная  хроматография).

5. Разделение (гель-фильтрация) и концентрирование (ультра-фильтрация).

6. Кристаллизация фермента (если необходимо).

7. Сушка.

8. Стандартизация.     

9. Получение готового  продукта.

 

 

ПОЛУЧЕНИЕ  УРЕАЗЫ

 

Сырье – семена

столового  арбуза.

Семена измельчают  на 

валковой дробилке.

Экстрагируют в реакторе 

с мешалкой раствором 

солей натрия хлорида  и 

натрия карбоната  в течение 2-х часов при комнатной  температуре.

Экстракт отделяют  от сырья центрифугированием. Для  осветления экстракта центрифугируют  повторно и охлаждают до 10°С.

ПОЛУЧЕНИЕ  УРЕАЗЫ

 

Уреазу выделяют из экстракта двойным высаливанием насыщенным раствором аммония сульфата в нейтральной среде: выделившийся при первом высаливании осадок выбрасывают, после второго высаливания осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде очищенной и охлаждают до 10°С.

Затем фермент осаждают фракционированием этанолом, отделяют центрифугированием и получают мазеобразный осадок, который растворяют в воде и сублимируют.

Выход составляет 0,3%.

Применение  уреазы

 

Уреаза катализирует гидролиз мочевины до углекислого газа и аммиака.

Применяют микрокапсулированную уреазу для очистки крови от мочевины и для проведения гемодиализа в аппарате «искусственная почка».

ЛИТЕРАТУРА

 

1.   Фармацевтическая  биотехнология : рук.  к  практ. занятиям: учеб. пособие для студентов/С.Н.Орехов ; под ред. В.А.Быкова,  А. В. Катлинского.-М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009.-381 с.  

2. Биотехнология: Учеб. пособие для  студентов / Ю.О.Сазыкин, С.Н.Орехов, И.И.Чакалева// Под ред.В.Катлинского.-М.: Академия, 2008. – 256 с.

3. Технология лекарственных  форм.Т.2 /Под ред. Л.А. Ивановой.- М.,1991.- 544 с.

4. Основы фармацевтической  биотехнологии: учеб.  пособие для  студентов / Т.П.Прищеп, В.С.Чучалин, К. Л. Зайков и др.-Ростов н/Д.: Феникс; Томск: Изд-во  НТЛ, 2006.-251 с.

5. Клунова, С.М. Биотехнология : учеб. для студ. высш. учеб. заведений/ С.М.Клунова, Т.А.Егорова, Е.А.Живухина. – М. : Академия, 2010. – 256 с.

6. Биотехнология: теория  и практика: Учеб.пособие для вузов / Н.В.Загоскина, Л.В.Назаренко, Е.А.Калашникова, Е.А.Живухина/ Под ред. Н.В.Загоскиной, Л.В.Назаренко. – М.:Издательство  Оникс, 2009.- 496 с.