Диагностика, лечение и профилактика хламидиоза кошек и собак

Диагностика микроскопическим, серологическим и молекулярно-генетическим методами проводится согласно инструкциям по применению соответствующих диагностикумов и тест-систем.

Материал для исследования.

От больных и подозрительных по заболеванию животных берут фекалии, соскобы с конъюнктивы, гениталий, используя при этом стерильные инструменты, посуду или упаковочную тару. Исследуемый материал вносят в стерильные пробирки с физиологическим раствором в количестве 1 мл. Пробирки помещают в сосуд со льдом и направляют нарочным в лабораторию. Материал должен быть доставлен в лабораторию в течение 24 часов.

От подозрительных по заболеванию  и абортировавших животных берут  кровь дважды: первый раз в период клинического проявления болезни, второй – спустя 14 - 21 день после первого  взятия с целью получения  сыворотки. Сыворотку крови получают по общепринятой методике, и в количестве 1 - 2 мл направляют в лабораторию, где её хранят при - 20°С. Сыворотку, полученную от первого и второго взятия крови, исследуют одномоментно. Гемолизированная, проросшая сыворотка исследованию не подлежит.

Микроскопический метод.

Световая микроскопия. Из исследуемого материала готовят препараты-отпечатки или препараты-мазки. Препараты окрашивают по Стемпу, Маккиавелло, Романовскому-Гимзе, по Маккиавелло в модификации Здродовского, по модифицированному методу Гименеж. В препаратах хламидии, располагаются отдельно или скоплениями внутри и вне клеток. При окраске по Стемпу хламидии ярко-красные, цитоплазма клеток бледно-зеленая, ядра клеток окрашены в бледно-зеленый цвет несколько интенсивнее, чем цитоплазма. При окраске по Маккиавелло хламидии приобретают рубиново-красный цвет, цитоплазма клеток – светло-синяя, ядра – темно-синие, а по Романовскому-Гимзе – возбудитель хламидиоза окрашивается в темно-фиолетовый цвет, цитоплазма клеток фиолетово-голубая, ядра сине-фиолетовые.

Люминесцентная  микроскопия. Для индикации хламидий в исследуемом материале используют метод флуорохромирования. Исследуют в люминесцентном микроскопе (лучше в падающем свете) с комбинацией фильтров СЗС, БС, ФС. Элементарные тельца хламидий флуоресцируют ярко-зеленым светом, их промежуточные формы — от соломенно-темного до оранжевого свечения. Подобные структуры обнаруживают, как внутри, так и вне клеток.

Идентификация хламидий проводится с  помощью реакции иммунофлуоресценции (РИФ). Используют прямой и непрямой варианты.

Для приготовления препаратов используют стекла с матовой площадкой у  края и надписи ведут простым  карандашом.

Прямой метод  иммунофлуоресценции. Фиксированные холодным ацетоном препараты после промывания ФСБР обрабатывают синькой Эванса 30-40 с, промывают водопроводной водой. При отсутствии синьки Эванса препараты обрабатывают смесью в равных объемах, состоящей из флуоресцирующей хламидийной сыворотки (содержит антитела против хламидий, меченые ФИТЦ) и бычьего альбумина, меченного родамином, взятого в удвоенном титре.В случае применения синьки Эванса препараты обрабатывают только меченой флуоресцирующей хламидийной сывороткой (в термостате при +37°С в течение 30-40 мин во влажной камере). Тщательно промывают ФСБР, наносят каплю забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом, исследуют под люминесцентным микроскопом.

Непрямой вариант реакции иммунофлуоресценции (РИФ). Готовят следующие растворы: фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ) —6,8 г NаС1, 0,63 г КН₂РО₄ и 1,48 г Nа₂НРО₄ последовательно растворяют в 1 л дистиллированной воды рН 7,2; забуференный глицерин - смешивают одну часть ФСБР с девятью частями глицерина; раствор синьки Эванса: 1 г синьки растворяют в 100 мл дистиллированной воды во флаконе из темного стекла. Для приготовления рабочего раствора красителя (1: 10000) берут 0,1 мл раствора 1: 100 и объем доводят дистиллированной водой до 10 мл.

Метод выделения и культивирования  хламидий. Выделение хламидий из исследуемого материала проводят на куриных эмбрионах, культуре клеток. Чаще всего для выделения хламидий используют заражение куриных эмбрионов суспензией исследуемого материала. Куриные эмбрионы заражают в желточный мешок или хорион-аллантоисную оболочку, Яйца должны быть получены от кур, в рацион которых не добавляли антибиотики. Оптимальный возраст эмбрионов для заражения 6-7 суток. Доза для заражения составляет 0,2 - 0,5 мл исследуемого материала. Эмбрионы инкубируют в термостате при 37°С и овоскопируют  ежедневно. Гибель эмбрионов в 1-ые двое суток считают неспецифической. Специфическая гибель их начинается на 3 - 4-ые сутки и может регистрироваться до 10 - 12-ого дня. При отсутствии специфической гибели эмбрионы на 12-й день вскрывают и проводят пассаж по описанной выше методике. Рекомендуется проводить не менее трех последовательных пассажей, используя при этом центрифугат 10 - 15%  суспензии желточных мешков. Погибшие эмбрионы вскрывают, желточные мешки отбирают и готовят из них препараты-отпечатки. Аллантоисную жидкость проверяют на стерильность путем высева на обычные питательные среды. Препараты окрашивают и микроскопируют. Результат считают положительным в случае обнаружения хламидий в препаратах, приготовленных из желточных мешков куриных эмбрионов любого из 3-х пассажей.

Хламидии из  исследуемого материала  можно выделять путем внутрибрюшинного, интраназального, интрацеребрального, интраторакального заражения морских  свинок. Результат исследования считают  положительным при обнаружении  хламидий в препаратах-отпечатках из органов павших лабораторных животных в любом из 3-х последовательных пассажей с помощью световой и люминесцентной микроскопии.            

Серологический метод. Хламидии имеют групповой термостабильный антиген, который выявляют в серологических реакциях: РСК, РДСК, РНСК, РНГА, ИФА. Наибольшее применение в практике получила РДСК, основанная на выявлении специфических антител в сыворотке крови абортировавших животных (нарастание титра в 2 и более раза). Абортировавших свиноматок исследуют дважды. Кровь от свиноматок берут в день аборта и спустя 21 день после него. С помощью РСК проводят массовое обследование поголовья, что позволяет выявлять бактерионосителей и оценивать эпизоотическую ситуацию в хозяйстве. Наличие комплементсвязывающих антител к хламидийному антигену в низких титрах – показатель инфицированности животных.

Иммуноферментный анализ применяют для ретроспективной диагностики хламидиоза. Используют твердофазный метод в направлении идентификации антигена и антител. Сущность ИФА заключается в специфическом взаимодействии антител и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу антивидового иммуноглобулина, меченного ферментом, способным вызывать разложение субстрата с образованием цветного продукта ферментативной реакции. Основанием для постановки предварительного диагноза на хламидиоз является увеличение титра антител в парных пробах сывороток в 2-4 раза.

Молекулярно-генетический метод. Метод предназначен для выявления ДНК хламидий с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в патологическом материале от животных. Суть  ПЦР заключается в амплификации, т.е. увеличении числа копий строго определенных  фрагментов молекулы ДНК или РНК (праймеров) искомого агента in vitro с последующей индикацией амплификона (амплифицируемый участок ДНК) методом электрофореза или другим методом. ПЦР позволяет идентифицировать возбудитель в количестве 1 бакт. клетки в пробе, специфичность 100%. Идентифицируют хламидии и их антигены методами световой и люминесцентной микроскопии (РИФ), в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА или с помощью ПЦР.

Диагноз на хламидиоз считают установленным  в одном из следующих случаев:

1. При выделении возбудителя  из исследуемого материала и  его идентификации;

2. При получении нарастания титра  антител в парных пробах сыворотки  крови больных или переболевших животных в РДСК, РНСК, РНГА, ИФА в два и более раз;

3. При выявлении ДНК хламидий  в ПЦР.

При диагностике хламидиоза предусмотрены  следующие сроки исследований:

• выявление специфических антител – от 1 до 5 дней;
• световая микроскопия – от 30 минут до 2 часов;
• люминесцентная микроскопия – до 3 часов;
• выделение и идентификация хламидий – от 7 до 40 дней;
• выявление ДНК хламидий - от 4 часов до 2 суток.

 

В Архангельской областной  ветеринарной лаборатории проводят исследования на хламидиоз плотоядных методами лабораторных исследований - выявление специфических антител в сыворотке крови больных в РСК, РНГА, ИФА, ПЦР, что позволяет точно подтвердить или опровергнуть предварительный диагноз, поставленный на основании клинических признаков.

Для профилактики и лечения хламидиозов в ветеринарной клинике «Надежда» применяют препараты тетрациклинового ряда (окситетрациклин, тетрациклина гидрохлорид, доксициклин, хлортетрациклин), но при этом из рациона следует исключить молочные продукты, содержащие ионы кальция и магния, которые с препаратами тетрациклинового ряда (кроме доксициклина) образуют нерастворимые комплексы. Для лучшего результата лечения применяют иммуностимулирующие препараты: Т-активин, имунофан, камедон, риботан, циклоферон, миксоферон, анандин.

 

Для профилактики хламидиоза кошек в данной ветеринарной клинике применяют вакцины:  Fel-O-Vax - против кальцивироза, ринотрахеита, панлейкопении и хламидиоза кошек; PureVax RCP/RCPCh/RCPChFeLV - против панлейкопении, кальцивироза, ринотрахеита/панлейкопении, хламидиоза и лейкоза кошек; Хламикон - вакцина против хламидиоза собак и кошек; вакцина против хламидиоза плотоядных животных инактивированная эмульсионная ВНИВИ. Чаще для вакцинации кошек используется вакцина Мультикан-4, что объясняется ее экономической доступностью. Вакцинации подлежат котята с 8-ми недельного возраста, ревакцинация через 21-28 дней и в возрасте 1год. Иммунитет - через 14 дней после второй иммунизации. Применяемые схемы вакцинации в клинике табл.1 и табл.2.

Таблица 1 - Схема вакцинации кошек

1-я вакцинация котят	12 недель	панлейкопения, калицивироз, ринотрахеит, хламидиоз
2-я вакцинация котят	15 недель	то же + бешенство
3-я вакцинация котят	1 год	то же + бешенство

Взрослых кошек ревакцинируют 1 раз в год.

Таблица 2 - Примерная схема вакцинации кошек в зависимости от вида вакцин

 

Возраст	Вакцина
8 недель	Нобивак Tricat PureVax Fel-O-Vax
12 недель	Нобивак Tricat PureVax Fel-O-Vax Квадрикат ГК+ПБ
После смены зубов*	Нобивак Tricat PureVax Fel-O-Vax
В год, далее ежегодно.	Нобивак Tricat PureVax Fel-O-Vax Квадрикат ГК+ПБ

       

Вакцинацию собак проводят вакциной «Хламикон» по схеме:

9 мес. - 1мл независимо от возраста и веса животного;

через 21 день повторно.

Ревакцинация 1 раз в год.

 

 

Заключение

 

 Ветеринарная клиника «Надежда» проводит мероприятия по лечению и профилактике хламидиоза согласно ветеринарным требованиям. В клинике при поступлении животных с подозрением на хламидиоз проводится анализ всех клинических данных, подтверждение диагноза проводится по результатам лабораторных исследований, проводимых Архангельской ветеринарной лабораторией.

Лечение животных с подтвержденным диагнозом проводится препаратами  тетрациклинового ряда с применением  иммуностимуляторов, что дает благоприятный  прогноз исхода заболевания.

Для более высокой степени профилактики, на мой взгляд, необходимо вакцинировать против хламидийной инфекции всех кошек, обращающихся в клинику, объясняя важность данной процедуру их владельцам. Данная мера может быть  применена и к профессиональным заводчикам собак, которые не всегда правильно оценивают опасность заболевания не только для животного, но и для людей.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список  литературы

 

 

1. Белоусов В.И. Средства специфической профилактики и диагностики хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза животных.//Автореф. дис. д-ра вет. наук. - М. - 1997. - 41с.
2. Бортничук В.А. Хламидиоз свиней.//Справочное издание. “Урожай” - Киев. - 1991. - 193с.