Питательные среды

 Нередко наряду с  «положительной» селекцией проводится  и «отрицательная»— при помощи  избирательно действующих ингибиторов.  На питательной среде, содержащей  азид, в аэробных условиях растут, например, молочнокислые бактерии, а рост других аэробных микроорганизмов  подавляется. Азид, цианид и H2S оказывают избирательное действие  па те аэробные организмы, в  дыхании которых участвуют цитохромы.  В медицинской диагностике пользуются  избирательным подавлением для  обнаружения Corynebacterium diphtheriae (применение  питательных сред, содержащих теллурит) и патогенных Enterobacteriaceae (агаризованные среды с добавлением висмута). В посевном материале могут присутствовать различные штаммы с одинаковым типом обмена веществ, отличающиеся друг от друга лишь незначительно, например лишь по оптимальному значению рН или по скорости роста. Если для получения накопительной культуры использовать такой материал, то доминировать будет наиболее адаптированный к данным условиям или наиболее быстро растущий штамм, все же остальные будут подавлены и выделить их не удастся. Поэтому в тех случаях, когда хотят выделить максимальное число штаммов, растущих при определенных элективных условиях, посев следует проводить непосредственно в чашки. На плотных элективных средах штаммы, которым условия благоприятствуют, образуют колонии. При достаточно большом расстоянии между колониями конкуренция за питательные вещества не может иметь места; штаммы, растущие более медленно, не подавляются растущими быстрее, так что те и другие могут быть выделены раздельно. В этой обзорной таблице объединены данные относительно получения накопительных культур у микроорганизмов с разными типами обмена веществ. Чистую культуру микроорганизма (последний этап выделения) получают обычно па (или в) плотной питательной среде. Процедура начинается с отделения от популяции клеток одной-единственной клетки. Обязательное требование состоит в том, чтобы вырастающая из клетки колония оставалась изолированной от других клеток или колоний. Аэробные бактерии выделяют либо по методу Коха — рассевая суспензию по поверхности среды в чашках, либо, что легче, размазывая каплю платиновой петлей по агаризованной среде. Анаэробные бактерии суспендируют в расплавленном агаре с температурой 45°С и проводят инкубацию без доступа воздуха. Тщательное отделение одной колонии, повторное суспендирование в жидкости и повторное нанесение мазка или разведение в агаре позволяют получать чистые культуры большинства микроорганизмов.

 

 

Заключение.

Питательная среда — вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро- и микроорганизмов.

Требования, предъявляемые  к средам:

Быть питательными, иметь оптимальную концентрацию водородных ионов - pH, быть изотоничными для микробной клетки; быть стерильными, плотные среды́ должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию, обладать определённым окислительно - восстановительным потенциалом, быть  унифицированным.

Классификация.

 По исходным компонентам: натуральные среды, синтетические среды

  По консистенции ( степени плотности): жидкие, полужидкие, плотные

  По составу: простые, сложные

 По назначению: основные, специальные,  элективные, дифференциально-диагностические,  консервирующие.

Приготовление сред

Посуда для приготовления  сред не должна содержать посторонних  веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов  железа, которые могут попасть  в среду при варке её в ржавых кастрюлях. Лучше пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой  посудой. Новую стеклянную посуду предварительно кипятят 30 минут 1-2% растворе хлороводородной кислоты, после чего в течение часа прополаскивают в проточной воде.

Этапы приготовления

1. варка: среды варят на открытом огне, водяной бане, автоклаве или варочных котлах.
2. установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.
3. осветление производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.
4. фильтрация жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена - они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
5. разливают среды не более чем на ¾ емкости, т.к. при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.
6. стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.
7. контроль

• для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают.

• химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов.
• для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Использованная  литература:

1.Е.З Теппер и др. «Практикум по микробиологии» М. «Колос» 1979

2.Г. Шлегель «Общая микробиология» М. «Мир» 1972.

3.http://www.mikrobiki.ru/mikrobiologiya/osnovy-mikrobiologii

4. http://labx.narod.ru/documents/pitatelnye_sredy.html

5. http://biohold.ru