Специфика химических свойств и особенности фармакологического действия лекарственных производных пролина

Растворимость. Легко растворим в метаноле и диметилформамиде, растворим в спирте 96 %, умеренно растворим в воде, практически нерастворим в хлороформе.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в суспензии с вазелиновым маслом в области от 4000 до 400 см-1, по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца эналаприла малеата.

Температура плавления. От 142 до 147 °С.

Удельное вращение. От –41,0° до –43,5° в пересчете на сухое вещество (1 % раствор субстанции в метаноле).

Прозрачность раствора. 1 % раствор субстанции в воде должен выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора. 1 % раствор субстанции в воде должен выдерживать сравнение с эталоном В9.

рН. От 2,0 до 3,0 (1 % раствор).

Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Буферный раствор А (рН 2,5). 2,8 г натрия фосфата однозамещенного растворяют в 900 мл воды, доводят рН раствора фосфорной кислотой до 2,5, доводят объем раствора водой до 1000 мл и перемешивают.

Буферный раствор Б (рН 6,8). 2,8 г натрия фосфата однозамещенного растворяют в 900 мл воды, доводят рН раствора 9 М раствором натрия гидроксида до 6,8, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Подвижная фаза А (ПФ А). Буферный раствор Б – ацетонитрил (95:5).

Подвижная фаза Б (ПФ Б). Буферный раствор Б – ацетонитрил (34:66).

Растворитель. Буферный раствор А – ацетонитрил (95:5).

Испытуемый раствор. 30,0 мг   субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 25 мл растворителя, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают.

Раствор сравнения. 1 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл,  доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы.  
7,5 мг стандартного образца эналаприла малеата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 15 мл растворителя, доводят объем растворителем до метки и перемешивают.

Примесь А: (2S)-1-[(2S)-2-[[(1R)-1-(этоксикарбонил)-3-фенилпропил]-амино]пропаноил]пирролидин-2-карбоновая кислота.

Хроматографические условия

Колонка                            - 150  х 4,1 мм, сополимер стирол-дивинилбензол, 5 мкм;

Скорость потока              - 1,4 мл/мин;

Температура колонки      - 70 оС;

Детектор                           - спектрофотометрический, 215 нм;

Объем пробы                   -  50 мкл

Градиентное элюирование:

Время, мин	ПФ А, %	ПФ Б, %
0-20	95 ® 40	5 ® 60
20-25	40	60
25-26	40 ® 95	60 ® 5
26-30	95	5

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы не менее 5 раз. время удерживания примеси А относительно эналаприла малеата  – около 1,1. Коэффициен р/v между пиками примеси А и эналаприла должен быть не менее 10.

Относительное стандартное отклонение для площади пика эналаприла не более 1,0 %.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения.

На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика примеси А не должна превышать площадь пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0 %).

На хроматограмме испытуемого раствора площадь любого пика, отличного от основного пика и пика примеси А, должна быть не более 0,3 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3 %); сумма площадей пиков любых неидентифицированных примесей должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0 %).

Не учитываются пик малеиновой кислоты и пики с площадью менее 0,05 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения.

Потеря в массе при высушивании. Определение проводят одним из методов.

1) Около 1,0 г (точная навеска) субстанции  сушат  при температуре 

60 оС при остаточном давлении не выше 5 мм рт.ст. в течение 2 ч.

2) Около 1,0 г (точная навеска) субстанции  сушат при температуре от 100 до 105 оС до постоянной массы.

Потеря в массе не должна превышать 1,0 %.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1,0 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1 % и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001 %).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Около 0,3 г (точная навеска) субстанции  растворяют при перемешивании в 20 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 5 мл уксусного ангидрида и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты до зеленого окрашивания (индикатор – 0,3 мл 0,1 % раствора кристаллического фиолетового).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М  раствора хлорной кислоты соответствует 49,25 мг  С20Н28N2O5  × С4Н4О4.

Хранение. В сухом, защищенном от света месте[9].

2.3 Подлинность

Подлинность капроприла.

1. ИК-спектры каптоприла должен соответствовать спектрам соответствующих стандартных образцов (Фармакопея). Характеристические полосы в ИК-спектре каптоприла: 1742, 1589, 1245, 1229, 1202, 1192 см-1. Удельное вращение каптоприла от -125° до -134° (с 1,0%; абс. этанол)[1].
2. УФ-спектр каптоприла имеет 1 слабо выраженный максимум, который не применим для количественного определения (215 нм).
3. Каптоприл и идентифицируют методом ВЭЖХ по временам удерживания основных пиков.
4. Третичный атом азота определяют с привлечением общих осадительных реактивов на алкалоиды(пикриновая к-та, реактив Драгендорфа).
5. Карбоксамидную (каптоприл) и сложноэфирную связь (эналаприла малеат) обнаруживают гидроксамовой пробой:

 

 

 

 

6. Меркаптогруппу (SН) в каптоприле переводят в ионогенное состояние и обнаруживают реакцией с нитропруссидом натрия.
7. SН-группа в каптоприле обесцвечивает раствор йода (применяют для количественного определения)[2]:

 

 

Подлинность эналаприла малеата.

1. ИК-спектры эналаприла должен соответствовать спектрам соответствующих стандартных образцов (Фармакопея ).Оба препарата в пирролидиновом кольце имеют хиральный центр (С-2) и являются левовращающими изомерами.
2. В УФ-спектре этанольного раствора эналаприла малеата наблюдается 1 максимум с длиной волны 260 нм (ароматическое кольцо).
3. Эналаприл идентифицируют методом ВЭЖХ по временам удерживания основных пиков[2].
4. Третичный атом азота определяют с привлечением общих осадительных реактивов на алкалоиды.
5. Сложноэфирную связь обнаруживают гидроксамовой пробой:

 

 

 

 

6. После щелочного гидролиза эналаприла выделяется этанол, который подтверждают йодоформной пробой:

 

 

7. Нингидриновая проба за счет наличия аланина в эналаприле (сине-фиолетовое окрашивание)[1]:

 

 

 

8. На двойную связь в малеиновой кислоте:
9. а)с калия перманганатом в кислой среде - обесцвечивание.
10. б)обесцвечивание бромной воды с образованием дибромянтарной кислоты, которую определяют по т. пл.

2.4 Количественное определение

 Содержание каптоприла определяют  йодатометрическим методом, основанном на окислении меркаптогруппы йодом. Точную навеску (около 0,3г) растворяют в 100 мл воды в колбе с притёртой пробкой, добавляют 10 мл 3,6 М серной кислоты и 1,0 г йодида калия, 2 мл раствора крахмала. Титруют 0,1 М раствором йодата калия до появления голубой окраски, не исчезающей в течении 30 сек.

 

 

 Количественное определение  каптоприла (таблетки) выполняют методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 212 нм (растворитель 0,1 моль/л раствор хлороводородной кислоты); эналаприла малеата - при длине волны 260 нм.

Эналаприла малеат определяют алкалиметрически по малеиновой кислоте (индикатор фенолфталеин)[6].

 

ВЫВОДЫ

1. Препараты каптоприл и эналаприл - синтетические ингибиторы ангиотензинконвертирующего (АПК) фермента, обладающие антигипертензивным действием, были созданы в 80-е годы ХХ века. В основе химической структуры этих препаратов лежит аминокислота -- пролин и гетероцикл - пирролидин. Каптоприл - первый синтетический серосодержащий ингибитор ангиотензинконвертирующего фермента. Эналаприл отличается от каптоприла более сложной химической структурой (содержит дополнительно аминокислоту аланин) и отсутствием меркаптогруппы. Он является «пролекарством», так как в организме гидролизуется до каптоприла[5].
2. Лекарственные препараты производные пролина , прописаны в фармакопейных статьях: Каптоприл (ФС 42-0239-07) ,  Эналаприла малеат (ФС 42).  Здесь описываются физико-химические свойства, растворимость, подлинность, цветность и другие характеристики.
3. Методы анализа лекарственных препаратов основаны на качественном и количественном определении подлинности. Качественные реакции проводят по функциональным группам: на карбоксамидную, сложноэфирную, меркаптогруппу, третичный атом азота. Используют физические методы ВЭЖХ, ИК- и УФ-спектры. Количественное определение выполняют титритометрически, спектрофотометрически.

 

    СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Арзамасцев, А.П. Лутцева, Т.Ю. Садчикова, Н.П. Химико-фармацевтический журнал. - 2001, - Т. 35, № 8. - С. 47-51.

2.Арзамасцев, А.П. Печенников, В.М. Родионова, Г. М. Анализ лекарственных смесей. - М.: Компания Спутник, 2000. - 275 с.

3. Безуглий, П.О. Грудько, В.О. Таран, С.Г. Фармацевтический анализ Золотые страницы.- М. 2001.- 238 с.

4. Беликов, В.Г.- Фармация, - 2000, Т. 49, № 1. - С. 23-25.

5. Беликов, В.Г. Курегян, А.Г. Тез. докл. междунар. Конф.\ «Фармация в XXI веке: инновации и традиции»\. СПб, 2006- С. 228.

6. Беликов, В.Г. Сами, А.А. Соловей, Н.В.- Фармация,-1995, Т. 44, № 4.-

7. Беликов, В.Г. - Фармация,-2002, Т. 28, № 5.- С. 52-63.

8.Гармаш, А.В. Современные методы  аналитической химии. - М. 2003.-  412 с.

9. Государственная Фармакопея Украины. Х. 2001,531 с.

10. Денисова, М.Н. Черкасова, О.Г. Харитонов,  Ю.Я. - Фармация,- 2006, Т. 45, № 3. - С. 22-28.

11. Карпенко, В.А. Степанюк, С.Н.- Фармация,-2008, Т. 33, № 5.- С. 50-52.

12.Колпакова, М.В. Попов, Д.М. Химики- фармацевтический журнал.-2004,- Т. 28, № 7.- С. 24-26.