Ветеринарная микробиология и иммунология

Несмотря на это молоко может служить причиной  заболевания  человека.  Через него могут передоваться возбудители болезней как животных, так  и  человека; кроме того, молоко  может  быть  причиной  распространения  эпидемий,  когда патогенные бактерии попадают в него от больных  или  перенесших  заболевание людей.

Патогенные микробы, передаваемые через молоко, делят  на  две  основные группы. В первую группу входят микробы, вызывающие  заболевания,  общие  для человека и  животных:  бруцеллез,  туберкулез,  сибирская  язва,  ящур, Ку- лихорадка, Коли инфекции; во вторую – микробы, передаваемые  от  человека  к человеку – брюшной тиф, паратифы, бактериальная дизентерия,  стрептококковые инфекции, стрептококковый энтротоксичекий гастроэнтерит, холера.

Основные    болезни,    вызываемые    патогенными     микроорганизмами,

передаваемыми через молоко, представлены ниже: Мастит (Str. Agalactiae, Staph. Aureus и др.) , Бруцеллез (Brucella ), Туберкулез (Mycobacterium tuberculosis),       Сибирская язва  (Bacillus anthracis), Ящур (Вирус), Ку-лихорадка (Coxiella burnetii) .

          

       Заболевания, передаваемые человеку через мясную продукцию.

Заразные  заболевания  животных,  передающиеся   человеку,   называются

антропозоонозами. Они могут распространяться  путем  контакта  с  зараженной тушей,  через  инфицированное  мясо,  воду,  почву,  инфицированную  тару  и одежду. К ним относятся такие заболевания, как: сибирская язва,  туберкулез, бруцеллез, ящур,  рожа  свиней,  листериоз,  сап,  туляремия,  ку-лихорадка,  лептоспироз и др

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2. Недостаточность иммунной системы (иммунодефициты). Механизм развития и способы профилактики

 

Важной проблемой сегодня являются иммунодефицитные состояния (ИДС) как  человека, так и животных. Иммунная система контролирует все защитные функции от внешних факторов, способных повредить организм (болезнетворные бактерии, вирусы, простейшие и другие чужеродные антигены), а также сохраняет «однородность» внутренней среды, уничтожая все перерожденные, неполноценные, генетически чуждые клетки. Поэтому любой сбой в функционировании этой системы приводит к тяжелым последствиям, в том числе и к развитию онкологических заболеваний.

Иммунодефициты – нарушения  нормального иммунного статуса  организма. По механизму развития и  клиническим признакам различают первичные (врожденные) иммунодефициты и вторичные, приобретенные в течение жизни. Вторичные иммунодефициты встречаются у сельскохозяйственных и домашних животных гораздо чаще, чем первичные, поскольку при первичных ИД рождается нежизнеспособный молодняк, не дающий потомства, а значит, и не передающий генетических нарушений иммунной системы последующим поколениям. Рассматривая вторичные ИД, выделяют возрастные иммунодефицитные состояния, в частности, дефицит колострального (молозивного) иммунитета.

Нарушения иммунного статуса животных ассоциируются с увеличением частоты и тяжести течения инфекций. У животных с иммунодефицитами наблюдается повышенная чувствительность к бактериальным и вирусным инфекциям, в том числе и к болезням, вызываемым ассоциациями условнопатогенных бактерий. Болезнь часто переходит в хроническую, не поддающуюся традиционным методам лечения форму. Кроме того, нарушение неспецифических защитных механизмов приводит к нарушению выработки специфических защитных антител при вакцинациях животных, и, как следствие, прорыву поствакцинального иммунитета.

Причиной развития вторичных иммунодефицитов  являются неблагоприятные воздействия  внешней среды (повышенная или пониженная температура и влажность воздуха, сквозняки, повышенное содержание вредных газов и микроорганизмов и т.д.). Ведущую роль в развитии ИД играют кормление и нарушения условий содержания животных, техногенные стрессы (перевозка, перегруппировка, перевеска, скученное содержание и др.). Особенно важно, чтобы рацион был сбалансирован по основным элементам: белкам, углеводам, витаминам, минеральным веществам, микроэлементам, поскольку ослабление резистентности животных наблюдается не только при недостаточном, но и при одностороннем кормлении.

Очень часто к нарушениям иммунной функции организма животных приводит скармливание кормов, пораженных токсинами плесневых грибов: имеются данные о иммуносупрессорном действии грибных метаболитов, причем отмечен синергизм – влияние смеси микотоксинов более выражено, чем отдельного токсина.

Кроме того, развитию иммунодефицитного состояния способствует применение фармакологических препаратов – некоторых антимикробных, противопаразитарных и гормональных.

Важным фактором является иммуносупрессия, вызванная вирусными агентами.   Например, на территории Краснодарского края наиболее часто проявляется влияние вирусов, возбудителей парагриппа3, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции, рото и короновирусных инфекций молодняка, респираторносинцитиальной инфекции и вирусной диареи – болезни слизистых, вирус лейкоза крупного рогатого скота. Инфицирование животных этими возбудителями приводит к развитию вторичных бактериальных персистентных инфекций и, как результат, к хроническим заболеваниям.

Серьезным фактором развития неонатальных инфекций и ранней смертности молодняка является дефицит колострального иммунитета – нарушение пассивной передачи материнских антител, наблюдающийся при поздних сроках выпойки новорожденным первых порций молозива, выпойки недостаточного количества или низкого его качества. Отсутствие материнских защитных антител у новорожденных препятствует борьбе организма с инфекционными агентами, с которыми он сталкивается в ранние сроки жизни, а вырабатывать в достаточном количестве собственные защитные антитела новорожденный начинает только с месячного возраста.

Клиническая картина иммунодефицитных состояний животных характеризуется  повторными желудочнокишечными, респираторными, почечными заболеваниями, гнойными инфекциями органов воспроизводства  и молочной железы, стойким отставанием  в росте и развитии, снижением продуктивности. Происходит поражение центральных и периферических органов иммунной системы, угнетаются клеточный и гуморальный иммунитет. Клиническая картина ИДС обычно характерна для сопутствующего заболевания, поэтому диагноз на наличие ИДС ставят по данным анамнеза и результатам лабораторных исследований.

Борьба с вторичными иммунодефицитными  состояниями невозможна без нормализации условий содержания и кормления. Для этого наиболее эффективно использование  комплексных полноценных витаминноминеральных кормовых добавок или премиксов, разработанных для различных видов и возрастов животных с учетом их физиологического состояния и продуктивности.

Рекомендуются лечебнопрофилактические  премиксы, например, формикс, применение которого способствует повышению устойчивости организма к неблагоприятным фактором внешней среды, а также стимулирует рост и развитие животных, повышает сопротивляемость молодняка к инфекционным и инвазионным болезням.

Показано применение витаминных препаратов, особенно препаратов бетакаротина, являющихся не только природным источником витамина А, которого, по данным лабораторных исследований, часто не хватает в организме сельскохозяйственных животных, но и обладающих антиоксидантным, антиканцерогенным, антимутагенным, детоксикационным и иммуностимулирующим действием, таких как каролин, карсел, карток, карсецел.

Показано применение препаратов селена и цинка. Для профилактики иммунодефицитов, вызванных токсинами плесневых  грибов, рекомендуется использование  адсорбирующих антитоксических премиксов.

Коррекция иммунодефицитных состояний  предполагает использование фармакологических  средств, изменяющих функциональную активность иммунной системы – иммуномодуляторов  и иммунокорректоров. Следует учитывать, что нарушения иммунной системы могут выражаться не только в снижении активности, но и гиперактивностью, в результате которой развиваются различные аутоиммунные и аллергические реакции. Поэтому бессистемное применение иммуностимуляторов, особенно без предварительной нормализации обменных процессов, может привести к развитию нежелательных побочных эффектов.

Наиболее эффективны и доступны для применения в настоящее время  препараты комплексной иммунокоррекции. К примеру, иммунофан (тимогексин) –  обладает иммуностимулирующим действием в отношении клеточного и гуморального звеньев иммунитета и применяется подкожно или внутримышечно в дозе 11,5 мкг/кг массы тела. БиомосВЖ – активизирует факторы неспецифической защиты, проявляет противовоспалительное, адаптогенное действие, применяется в дозе 10 мг/кг, внутрь в виде водного раствора. Препарат лозеваль обладает противовоспалительным, антимикробным и противовирусным действием, активизирует фагоцитоз и выработку защитных антител, применяется внутрь в дозе 1,52,0 мкл/кг массы тела, а левамизол – нормализует показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета, применяется внутрь в дозе 1–1,5 мг/кг массы тела. АСД, фракция 2 оказывает нейротропное действие на центральную и вегетативную нервную систему, обладает противовоспалительным, адаптогенным действием, применяется внутрь перед кормлением в дозе 1,52 мл/10 кг массы тела.

 

 

 

 

 

 

 

 

3. Реакция преципитации, практическое ее примение

 

Реакция преципитации - РП (от лат praecipilo осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиапьная иммунодиффузия, иммуноэпектрофорез и др.

 

Реакция кольцепреципитации. Данную реакцию применяют для выявления антигенов с помощью иммунной преципитирующей сыворотки, содержащей специфические антитела. Это качественный метод исследования Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Если в качестве антигенов в реакции используют прокипяченные и профильтрованные экстракты тканей, то такая реакция называется I реакцией-термопреципитации (реакция, при которой выявляют сибиреязвенный гаптен).

 

 

Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони. Для постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки. В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - пересекаются. Учет реакции проводят предварительно через 4 часа, окончательно - через 24-48 часов. Реакцию Оухтерлони можно использовать для определения токсичности бактерий, титра антител, активности стандартных диагностикумов или иммунных специфических сывороток .

 

 

Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини. Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др. Принцип радиальной диффузии положен в основу метода, применяемого для изучения токсигенности бактериальных культур и отбора из бактериальной популяции клонов с высокой степенью токсичности. В этом случае исследуемые культуры засевают в чашки с агаром , содержащим антитоксическую сыворотку. Вокруг отдельных колоний образуются кольца преципитации, диаметр которых прямо пропорционален степени токсичности штамма. 

 

Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммуннук сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации. 

В основе реакции лежит принцип  преципитации. ИЭФ, как правило, используется для исследования антигенной структуры микроорганизмов. Реакцию проводят в два этапа. Вначале проводят электрофоретическое разделение антигена в забуференном агаровом геле. Антигенный комплекс помещают в лунку, которая находится в центре геля, залитого на стеклянную пластинку. Затем через гель пропускают электрический ток, в результате происходит перемещение антигенов на неодинаковые расстояния соответственно своей электрофоретической подвижности. После этого в канавку, которая расположена по краю пластинки, вносят специфическую иммунную сыворотку и помещают во влажную камеру. Антигены и антитела диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте их соприкосновения образуются дугообразные линии преципитации. С помощью ИЭФ анализируются состав и количество белков сыворотки крови, спиномозговой жидкости, микробных протеинов.

Реакция флоккуляции (по Рамону) (от лат . f1оecus - хлопья шерсти) - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин - антитоксин или анатоксин - антитоксин. Ее применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина.

 

 

Реакция связывания комплемента (РСК)

РСК используется для лабораторной диагностики венерических заболеваний, риккетсиозов, вирусных инфекций (грипп, корь, клещевой энцефалит и др.) и основывается на способности комплемента связываться с комплексом АГ + АТ . Комплемент адсорбируется на Fc-фрагменте иммуноглобулинов G и М. Реакция протекает в две фазы. Первая фаза - взаимодействие антигена и антитела. В качестве материала, содержащего антитела, используется исследуемая сыворотка, к которой добавляется известный антиген. К этой системе добавляют стандартный комплемент и инкубируют при 37 ° С в течение одного часа.

Вторая фаза - выявление результатов  реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка кролика, содержащая гемолизины к эритроцитам барана). К смеси антиген + антитело + комплемент (1-я фаза) добавляют индикаторную систему и вновь инкубируют при 37° С в течение 30 - 60 мин, после чего оценивают результаты реакции. Разрушение эритроцитов происходит в случае присоединения к гемолитической системе комплемента. Если комплемент адсорбировался ранее на комплексе АГ + АТ , то гемолиз эритроцитов не наступает. Гемолиз происходит в том случае, когда в исследуемой сыворотке содержатся специфические антитела к диагностическому антигену. При отсутствии в исследуемой сыворотке специфических антител, комплекс АГ + АТ не образуется и комплемент остается несвязанным. При добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней и происходит гемолиз эритроцитов. Интенсивность РСК оценивают по четырехкрестной системе в зависимости от степени задержки гемолиза и наличия осадка эритроцитов. Все компоненты РСК, за исключением исследуемой сыворотки, должны быть оттитрованы.